Gå direkt till innehållet
NCH421K-celler
Vävnad
Hjärna
Sjukdom
Glioblastom
Synonymer
NCH421k

NCH421K-celler

Cell line · Produktnummer 300118

NCH421K är en mänsklig glioblastom-stamcellsliknande cellinje som härrör från en primär glioblastomtumör som erhållits från en vuxen patient. Denna cellinje tillhör en ...

€800.00exkl. moms och frakt
Lågt lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
  • CoA
1

01Allmän information

Beskrivning

NCH421K är en mänsklig glioblastomcellinje med stamcellsliknande egenskaper, härledd från en primär glioblastomtumör som erhållits från en vuxen patient. Denna cellinje tillhör en klass av tumörinitierande celler som behåller viktiga egenskaper hos neurala stamceller, däribland förmågan till självförnyelse, multipotens och förmågan att återskapa tumörens heterogenitet. NCH421K-celler odlas vanligtvis under serumfria förhållanden och växer som icke-vidhäftande neurosfärer, vilket är ett kännetecken för stamcellsliknande gliomkulturer. De uttrycker kanoniska stamcellsmarkörer såsom CD133 och nestin, vilket stöder deras klassificering som en glioblastomstamcellsliknande modell.

NCH421K uppvisar tillväxt och överlevnad som är starkt beroende av basisk fibroblasttillväxtfaktor (bFGF), vilket främjar proliferation och upprätthållande av stamcellsliknande egenskaper, medan epidermal tillväxtfaktor (EGF) har minimal effekt på dess expansion. Cellerna upprätthåller hög uttryck av stamcellsmarkörer under bFGF-stimulering och visar förmåga att bilda tumörer in vivo, vilket understryker deras tumörbildande potential. På grund av dessa egenskaper används NCH421K i stor utsträckning i studier av glioblastomstamcellsbiologi, terapeutisk resistens, differentieringsstrategier och utvärdering av riktade behandlingar som syftar till att utrota tumörinitierande cellpopulationer.

Denna cellinje etablerades av Christel Herold-Mende från glioblastomvävnad.

Vävnad
Hjärna
Sjukdom
Glioblastom
Synonymer
  • NCH421k

02Klassificering

Organism
Människa
Kön
Man
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Tumörframkallande
Ja
Fördubblingstid
35 till 40 timmar

04Identifierare

Källa
NCH421K (Cytion katalognummer 300118)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_x910

05Hantering och odling

Odlingsmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukos, w: 2,5 mM L-glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Tillsätt följande till odlingsmediet: 5 mg/L heparin, 20 ng/mL bFGF, 20 mikrogram/L EGF, 5 mg/L insulin, 100 mg/L transferrin, 5,2 mikrogram/L natriumselenit, 6,3 mikrogram/L progesteron, 161,1 mikrogram/L putrescin, 50 mg/L hydrokortison
Vidareodling
För subkultur av sfäroidkulturer börjar man med att mekaniskt dissociera sfäroiderna genom att pipettera upp och ner 5-10 gånger med en Eppendorf-pipett med 1000 μl filterspetsar. Centrifugera därefter blandningen vid 300 g i 5 minuter vid rumstemperatur för att pelletera cellerna. Kassera supernatanten och resuspendera cellpelleten i färskt odlingsmedium. Överför slutligen de resuspenderade cellerna till nya odlingskärl för att främja ytterligare sfäroidbildning. Detta tillvägagångssätt säkerställer en effektiv nedbrytning av sfäroiderna och gör dem redo för fortsatt tillväxt i en ny miljö
Såtäthet
1 till 2 x 105 celler/ml
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Återhämtning efter upptining
Låt cellerna återhämta sig från frysningsprocessen i minst 24 till 48 timmar.
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi 50% basalt medium + 40% FBS + 10% DMSO, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

07Donator

Donatorns ålder
66 år
Etnicitet
Kaukasisk