Úvod

Toto Bend.3 Bunky Táto bunka — známa aj pod synonymami bEND.3, b.End3, bEnd3, BEND-3, BEND3 a „brain-derived Endothelial cells.3“ — je transformovaná bunka mikrovaskulárneho endotelu z myšieho mozgu, ktorá sa stala jedným z najčastejšie používaných in vitro nástrojov v neurovaskulárnej biológii. Táto línia bola vytvorená z tkaniva endoteliómu myšieho mozgu po transformácii stredným T-antigénom polyomavírusu, čo je postup, ktorý jej poskytuje stabilnú, neobmedzenú schopnosť proliferácie pri zachovaní kľúčových endoteliálnych charakteristík. Od svojej charakterizácie na začiatku 90. rokov 20. storočia slúži bEnd.3 ako dostupný a reprodukovateľný náhradný model na štúdium hematoencefalickej bariéry (BBB), cerebrálnej ischémie, cievnej mozgovej príhody, reperfúzneho poškodenia, angiogenézy a vo všeobecnejšom zmysle biológie endoteliálnych buniek. Jeho využiteľnosť pri modelovaní narušenia BBB v kontexte ischemickej cievnej mozgovej príhody, Alzheimerovej choroby a traumatického poranenia mozgu z neho urobila široko používaný nástroj v základnom aj translačnom neurovedeckom výskume.

Hlavné závery

• bEnd.3 je transformovaná bunka mikrovaskulárneho endotelu myšieho mozgu, ktorá pochádza z mozgového tkaniva myši BALB/c a bola transformovaná stredným T-antigénom polyómového vírusu (Cellosaurus, prístupové číslo CVCL_0170).
• Široko sa používa ako in vitro model hematoencefalickej bariéry na skúmanie ischemickej cievnej mozgovej príhody, reperfúzneho poškodenia, Alzheimerovej choroby a neurozápalu.
• Tieto bunky exprimujú kľúčové markery spojené s hematoencefalickou bariérou (BBB), vrátane proteínov tesných spojení – claudínu-5, okludínu a ZO-1, ako aj eNOS a PECAM-1.
• Bunky bEnd.3 exprimujú markery lymfatického endotelu, ako sú LYVE-1 a VEGFR-3, čím sa rozširuje ich význam pre výskum v oblasti cievnej biológie.
• Táto bunková línia má dobu zdvojnásobenia 26–30 hodín, vďaka čomu je vhodná na experimentálnu prácu vo veľkom meradle.
• Nepriepustnosť bariéry je obmedzená: maximálny transendoteliálny elektrický odpor približne 130 Ω·cm² bol dosiahnutý iba v astrogliálnej kokultúre a táto línia nedokáže dostatočne rozlíšiť markery paracelulárnej a transcelulárnej priepustnosti.
• Ukázalo sa, že bunky bEnd.3 podporujú udržanie ľudských pluripotentných kmeňových buniek v úlohe podporných buniek, čím sa rozširujú ich možnosti využitia v biológii kmeňových buniek.

Čo je bEnd.3?

bEnd.3 bol izolovaný z mozgového tkaniva 6-týždňovej myši balb/c neurčeného pohlavia (prístupový kód Cellosaurus CVCL_0170). Pôvodné endoteliomové bunky boli získané transformáciou myších endoteliálnych buniek antigénom stredného T (mT) polyómového vírusu. Priekopnícka štúdia z roku 1990, ktorú vykonali Montesano, Pepper a kolegovia, preukázala, že endoteliomové bunky exprimujúce mT vykazujú výrazne zvýšenú proteolytickú aktivitu — najmä zvýšenú produkciu aktivátora plazminogénu typu urokinázy spolu so zníženou produkciou inhibítora aktivátora plazminogénu — a vytvárajú veľké cystické štruktúry podobné hemangiómom vo vnútri fibrínových gélov, čo vysvetľuje hlboké narušenie normálneho cievneho vývoja spôsobené týmto onkogénom [1]. Tento mechanistický základ pomohol definovať transformovaný fenotyp, ktorý je základom biologického správania a využiteľnosti bEnd.3 v experimentálnych podmienkach.

Následná charakterizácia podrobne definovala morfologický a molekulárny profil tejto buneckej línie. Omidi a spolupracovníci uviedli, že bunky bEnd.3 vykazujú v kultúre charakteristickú šupinatú morfológiu pripomínajúcu vreteno a exprimujú proteíny asociované s vezikulami, vrátane klatrínu, kaveolínu-1, flotilínu a dynaminu II, čo je v súlade s aktívnym mechanizmom vezikulárneho transportu [2]. Tá istá štúdia potvrdila prítomnosť transkriptov pre prvky tesných spojení ZO-1, JAM, okludín, klaudín-1 a klaudín-5, ako aj funkčný príjem glukózy sprostredkovaný GLUT-1 a eflux prostredníctvom P-glykoproteínu. V kokultúre s astrogliózou C6 dosiahli monovrstvy maximálny transendoteliálny elektrický odpor približne 130 Ω·cm², hoci autori tiež zistili, že bunky významne nerozlišovali medzi paracelulárnymi a transcelulárnymi sondami permeability. Yuen a kol. neskôr uviedli, že bunky bEnd.3 exprimujú aj markery lymfatického endotelu LYVE-1 a VEGFR-3, ako aj markery progenitorových buniek Sca-1 a CD133, a po stimulácii TNF-alfa tvoria kapilárne trubice — tento objav rozšíril biologický význam tejto buneckej línie nad rámec klasického výskumu krvných ciev [3].

Výhody bEnd.3

Jednou z najvýznamnejších výhod línie bEnd.3 je jej dostupnosť a praktická reprodukovateľnosť. Na rozdiel od primárnych mikrovaskulárnych endoteliálnych buniek mozgu, ktoré si vyžadujú náročné izolačné postupy a vykazujú obmedzenú schopnosť pasážovania, je bEnd.3 imortalizovaná línia, ktorú je možné spoľahlivo rozmnožovať v rôznych laboratóriách. S dobou zdvojnásobenia 26–30 hodín sú tieto bunky vhodné na experimenty vyžadujúce veľké množstvo jednotných buniek. Ich stabilná expresia endoteliálnych markerov — vrátane proteínov tesných spojení claudín-5, okludín a ZO-1, ako aj eNOS a PECAM-1 – z nich robí praktickú náhradu za mikrovaskulárny endotélium mozgu v širokom spektre experimentálnych podmienok, za predpokladu, že sa zohľadnia nižšie uvedené obmedzenia týkajúce sa bariérovej funkcie.

Všestrannosť línie bEnd.3 presahuje rámec viacerých výskumných disciplín. V rámci štúdií sa táto línia využívala na modelovanie narušenia hematoencefalickej bariéry (BBB) počas ischemickej cievnej mozgovej príhody a reperfúzneho poškodenia, na skúmanie neurozápalu vyvolaného adhéznymi molekulami, na profilovanie expresie angiogénnych génov a na skúmanie medzibunkovej komunikácie sprostredkovanej konnexínmi. Okrem toho Joubin a kolegovia preukázali, že bunky bEnd.3 dokážu udržať ľudské pluripotentné kmeňové bunky v nediferencovanom stave, pričom fungujú ako podporné bunky, ktoré je možné geneticky modifikovať — túto schopnosť nie je ľahké napodobniť pomocou krátkodobých primárnych kultúr. [4]. Táto široká škála uplatnenia svedčí o užitočnosti tejto bunkovej línie v neurovedách, cievnej biológii, farmakológii a vo výskume kmeňových buniek.

Obmedzenia programu bEnd.3

Napriek svojmu širokému využitiu má bEnd.3 ako model hematoencefalickej bariéry (BBB) významné obmedzenia. Omidi a spolupracovníci namerali maximálny transendoteliálny elektrický odpor iba okolo 130 Ω·cm², pričom táto hodnota bola dosiahnutá len v prípade spoločnej kultivácie s astrocytmi C6; čo je ešte závažnejšie, monovrstvy vykazovali len malý rozdiel medzi transcelulárnymi a paracelulárnymi sondami, pričom koeficienty permeability pre propranolol a sacharózu sa líšili len minimálne [2]. Autori dospeli k záveru, že táto metóda nie je vhodná na hodnotenie transendoteliálnej permeability, avšak naďalej má svoju hodnotu pre štúdium transportných mechanizmov hematoencefalickej bariéry. Údaje o permeabilite získané v tomto systéme by sa preto mali interpretovať s opatrnosťou a, pokiaľ je to možné, doplniť o systémy spoločnej kultivácie alebo validáciu in vivo.

Súvisiacou slabou stránkou je samotná organizácia tesných spojení. Song a Pachter porovnali bEnd.3 s čerstvo purifikovanými primárnymi mikrovaskulárnymi endoteliálnymi bunkami myšieho mozgu a zistili, že zatiaľ čo primárne bunky koncentrovali claudín-5, okludín a ZO-1 pozdĺž medzibunkových hraníc a oddeľovali okludín a ZO-1 od cytoskeletálnej kostry odolnej voči detergentom, bunky bEnd.3 vykazovali difúznu cytoplazmatickú lokalizáciu okludínu a ZO-1 a tieto proteíny zadržiavali prevažne v rozpustnej frakcii [5]. Expresia proteínu tesných spojení v bEnd.3 teda sama osebe ešte neznamená správnu tvorbu spojení.

Zmenená povaha bEnd.3, vyplývajúca z expresie onkogénu mT, môže tiež spôsobiť fenotypové artefakty, ktoré sa v normálnom mozgovom endotelii nevyskytujú. Zvýšená proteolytická aktivita — charakteristický znak endoteliomových buniek exprimujúcich mT [1] — a expresia lymfatických markerov, ako sú LYVE-1 a VEGFR-3, naznačuje, že táto bunková línia úplne neodzrkadľuje normálny endotél krvných ciev [3]. Okrem toho nie je v prípade tejto buneckej línie špecifikované pohlavie darcu, čo obmedzuje použiteľnosť získaných zistení pri výskumných otázkach zohľadňujúcich pohlavie. Tieto skutočnosti síce neznižujú hodnotu tejto buneckej línie, ale zdôrazňujú dôležitosť pochopenia jej špecifického biologického kontextu.

Zobraziť kompletné technické údaje a objednať

Aplikácie

Modelovanie hematoencefalickej bariéry a ischemická cievna mozgová príhoda

Najvýznamnejším využitím bEnd.3 je jeho použitie ako in vitro modelu hematoencefalickej bariéry v ischemických a postischemických podmienkach. Koto a jeho kolegovia preukázali, že hypoxia (1 % O₂) zmenila lokalizáciu a hladinu proteínu claudinu-5 v monovrstvách bEnd.3, čo spôsobilo merateľný pokles transendoteliálneho elektrického odporu, a potvrdili zodpovedajúcu stratu claudinu-5 v mikrovaskulárnom endoteli sietnice in vivo [6]. Tým sa potvrdila mechanistická súvislosť medzi prestavbou tesných spojení a narušením bariéry počas neurálnej hypoxie a bEnd.3 sa stal vhodným systémom na štúdium molekulárnych procesov, ktoré sú základom zlyhania hematoencefalickej bariéry pri cievnej mozgovej príhode.

Často citovaná štúdia Kima a kolegov použila túto bunkovú líniu ako in vitro model hematoencefalickej bariéry (BBB) vystavenú deprivácii kyslíka a glukózy (OGD) na simuláciu ischémie. Osemnásť hodín OGD vyvolalo bunkovú dysfunkciu, zvýšenú permeabilitu, degradáciu okludínu a aktiváciu autofagických dráh, pričom degradovaný okludín sa kolokalizoval s ischemickými autofagozómami; strata okludínu aj zmena permeability boli výrazne znížené inhibítorom autofagie 3-metyladenínom. Tie isté molekulárne zmeny a ich zvrátenie pomocou 3-metyladenínu boli následne reprodukované v mozgových kapilárach potkanov, u ktorých bola vykonaná okluzia strednej mozgovej tepny [7]. Táto práca stanovila mechanistický rámec spájajúci autofagický tok so stratou proteínov tesných spojení a poskytla dôležité translačné poznatky o patológii cievnej mozgovej príhody.

Doplnkový výskum preukázal, že agmatín potláča expresiu matrixových metaloproteáz-2 a -9 v mozgových endoteliálnych bunkách — vrátane bEnd.3 — vystavených poškodeniu spôsobenému OGD-reperfúziou, pričom downregulácia MMP-9 prebiehala súbežne s upreguláciou eNOS a zachovaným uvoľňovaním oxidu dusnatého, čo ponúka potenciálny neuroprotektívny mechanizmus relevantný pre poškodenia mozgu a reperfúzne poškodenia [8]. Štúdie o apoptóze sprostredkovanej Ang II ďalej ukázali, že hyperosid chráni bunky bEnd.3 a zachováva integritu in vitro monovrstvy hematoencefalickej bariéry (BBB), pričom pôsobí na JAM-A, claudín-5, ZO-1, caveolín-1 a Mfsd2a, čo naznačuje terapeutické možnosti pre cerebrovaskulárnu ochranu [9]. Výskum nadmernej expresie circLphn3 v bunkách bEnd.3 tiež zdôraznil úlohu nekódujúcej RNA pri udržiavaní expresie proteínov tesných spojení — vrátane ZO-1, ZO-2 a okludínu – po traumatickom poranení mozgu, pričom circLphn3 pôsobí ako molekulárna hubka pre miR-185-5p [10].

Neurozápal, endoteliálna toxikológia a Alzheimerova choroba

Bunky bEnd.3 sa vo veľkej miere používajú na štúdium zápalovej signalizácie na cerebrovaskulárnom endoteli. Jeong a spolupracovníci ukázali, že kadmium – všadeprítomný ťažký kov, ktorý sa hromadí mimo hematoencefalickej bariéry (BBB) – stimulovalo expresiu ICAM-1 v bunkách bEnd.3 prostredníctvom aktivácie NF-κB vyvolanej tyrozínovou fosforyláciou IκBα, a nie jeho degradáciou, čím poskytli mechanistický základ pre kadmiom indukovanú cerebrovaskulárnu toxicitu [11]. Podobne Zhang a spolupracovníci uviedli, že C-reaktívny proteín v koncentráciách 1–75 mg/l zvýšil expresiu ICAM-1 a VCAM-1 a únik LDH v bunkách bEnd.3, čo naznačuje priamu úlohu tohto proteínu akútnej fázy pri poškodení hematoencefalickej bariéry počas ischemickej cievnej mozgovej príhody [12].

V tejto bunkovej línii bola skúmaná aj toxicita endotelu vyvolaná pesticídmi. Jung a spolupracovníci preukázali, že N-nitrozo-karbofuran, nitrozo-metabolit karbamátového pesticídu karbofuranu, indukoval apoptózu v bunkách bEnd.3 prostredníctvom dráh MAP kinázy, pričom dráha ERK zohrávala dominantnú úlohu v bunkovej smrti [13]. Cytotoxicitu vyvolanú lyzofosfatidylcholínom v bunkách bEnd.3 skúmali Tsai a spolupracovníci, ktorí pripísali bunkovú smrť preťaženiu cytosolického vápnika, strate mitochondriálneho membránového potenciálu, aktiváciu p38 a aktiváciu kaspázy-3 — a to najmä bez tvorby reaktívnych foriem kyslíka — a identifikovali heparín ako ochrannú látku pôsobiacu nadol od p38 [14]. Novšie štúdie týkajúce sa liečby florfenikolom zdokumentovali remodeláciu F-aktínu sprostredkovanú ROCK/cofilínom, ktorá prispieva k zníženej proliferácii a migrácii v endoteliálnych bunkách bEnd.3 [15].

V oblasti výskumu Alzheimerovej choroby slúžia bunky bEnd.3 ako model narušenia hematoencefalickej bariéry (BBB) sprostredkovaného peptidom beta-amyloidu. Chan a kol. preukázali, že zmeny autofágie v bunkách bEnd.3 vyvolané oligomérmi Aβ boli blokované malou interferenčnou RNA RAGE, čím sa prepojila signalizácia RAGE prostredníctvom osi CaMKKβ/AMPK/mTOR s autofágiou závislým poškodením proteínov ZO-1, okludínu a klaudínu-5, ktoré tvoria kostru tesných spojení [16]. Samostatne sa preukázalo, že polyfenol zo semien liči chráni integritu hematoencefalickej bariéry inhibíciou aktivácie inflamasómu NLRP3 indukovanej Aβ(25–35) prostredníctvom autofagickej dráhy sprostredkovanej AMPK/mTOR/ULK1 v bunkách bEnd.3, pričom tieto výsledky potvrdila štúdia na transgénnych myšiach APP/PS1 — štúdia, ktorá posunula chápanie vzájomného pôsobenia autofágie a inflamazómu na neurovaskulárnom rozhraní [17]. Fotobiomodulácia bola skúmaná v rovnakom kontexte: Ma a spolupracovníci použili LPS-stimulované bunky bEnd.3 spolu s myšami APP/PS1, aby preukázali, že ožarovanie v blízkej infračervenej oblasti zlepšuje mitochondriálny energetický metabolizmus, zvyšuje expresiu okludínu, klaudínu-5 a ZO-1 a chráni integritu bariéry spôsobom závislým od AMPK [18].

Angiogenéza a vaskulárna signalizácia

bEnd.3 sa ukázal ako veľmi informatívny v štúdiách angiogénnej signalizácie. Yue a kolegovia použili cDNA mikročip na profilovanie expresie angiogénnych génov v bunkách bEnd.3 ošetrených bazickým fibroblastovým rastovým faktorom (bFGF), pričom identifikovali zvýšenú expresiu proangiogénnych génov vrátane ADAMTS1, MMP-9, angiopoetínu-1, PDGF-B a G-CSF, zníženú expresiu antiangiogénnych génov, ako sú TIMP-2 a TSP-3, a indukciu cyklooxygenázy-2 (COX-2) na úrovni mRNA aj proteínov [19]. Tento vysokokapacitný prístup potvrdil, že bEnd.3 je vhodnou platformou pre profilovanie angiogenézy na úrovni genómu.

Pomocou buniek bEnd.3 boli zmapované aj angiogénne reakcie vyvolané hypoxiou. Zhu a spolupracovníci preukázali, že hypoxia zvyšuje expresiu mRNA a proteínu endoglínu (CD105) v bunkách bEnd.3 prostredníctvom aktivácie p38 MAPK, pričom inhibítory tejto dráhy – a dominantne negatívny MKK3 – potláčajú indukciu endoglínu [20]. Keďže endoglin je mutovaný pri dedičnej hemoragickej teleangiektázii a je upregulovaný počas aktívnej angiogenézy, tieto zistenia prepojili signálnu dráhu MAPK citlivú na hypoxiu s patologickou vaskulárnou remodeláciou. Li a spolupracovníci ďalej ukázali, že hypoxia upreguluje aktivitu CD73 (ekto-5'-nukleotidáza), mRNA a proteínu v bunkách bEnd.3 časovo závislým spôsobom, zatiaľ čo reoxygenácia spočiatku túto indukciu zvrátila, než hladina CD73 opäť stúpla pri predĺženej reoxygenácii — čo naznačuje, že tvorba adenozínu pôsobí ako neuroprotektívny mechanizmus počas ischémie-reperfúzie [21].

Signalizácia angiopoetínu bola podrobne študovaná s využitím buniek bEnd.3 ako modelového systému. Shi a spolupracovníci vytvorili bezsérumový model apoptózy v bunkách bEnd.3 a preukázali, že angiopoetín-1 inhibuje apoptózu mikrovaskulárnych endoteliálnych buniek prostredníctvom mechanizmu zahŕňajúceho zníženie hladiny Bax, zvýšenie hladiny Bcl-2 a znížené uvoľňovanie cytochrómu C z mitochondrií do cytoplazmy [22]. Perry a spolupracovníci rozšírili biológiu angiopoetínu na výskum hemangiómov, pričom preukázali konštitutívnu aktiváciu receptora Tie-2 v ľudských hemangiómoch v dojčenskom veku a použili bunky bEnd.3 ako myší modelový systém hemangiómu, v ktorom farmakologická inhibícia produkcie angiopoetínu-2 takmer úplne zastavila rast nádoru in vivo [23].

eNOS, konnexíny a endoteliálna funkcia

Biológia endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého (eNOS) bola v bunkách bEnd.3 charakterizovaná s značnou presnosťou. Govers a spolupracovníci pomocou imunofluorescenčnej mikroskopie ukázali, že lokalizácia eNOS na plazmatickej membráne kriticky závisí od medzibunkového kontaktu, pričom dochádza k jej výraznému nahromadeniu v miestach medzibunkového kontaktu, čo pripomína distribučný vzor PECAM-1 skôr než VE-kadherínu alebo plakoglobínu, a aktivita eNOS je vyššia v konfluentných monovrstvách ako v subkonfluentných, napriek nezmenenej expresii [24]. Toto priestorové prepojenie medzi lokalizáciou a aktivitou eNOS zdôraznilo význam buniek bEnd.3 ako modelu, v ktorom je možné zmysluplne skúmať fyziologický kontext konfluentného endotelu.

Bevers a spolupracovníci skúmali oddelenie eNOS v bunkách bEnd.3, ktoré exprimujú eNOS na úrovniach o viac ako dva rády vyšších ako porovnávaná endoteliálna línia, pričom postrádajú iNOS a nNOS. Zistili, že suplementácia tetrahydrobiopterínom (BH4) zvýšila produkciu NO a znížila tvorbu reaktívnych foriem kyslíka, zatiaľ čo pridanie dodatočného L-arginínu ďalej zvýšilo VEGF-indukované ROS — čo naznačuje, že v tomto kontexte je hnacou silou oddelenia relatívny deficit BH4, a nie dostupnosť arginínu [25]. Tento výsledok má priamy význam pre vaskulárne komplikácie ochorení, ako je hypertenzia a ateroskleróza, pri ktorých môže dlhodobá nadmerná expresia eNOS paradoxne podporovať oxidačný stres.

Komunikácia cez medzerové spojenia sprostredkovaná konnexínmi bola tiež skúmaná v bunkách bEnd.3. Kwak a spolupracovníci porovnali expresiu konnexínov a medzibunkové prepojenie pred a po mechanickom poranení monovrstiev bEnd.3, pričom v mieste poranenia pozorovali poraním indukovanú zvýšenú expresiu Cx43 a zníženú expresiu Cx37, pričom Cx40 nebol ovplyvnený [26]. Stabilná transfekcia dominantne negatívnymi inhibítormi konnexínov predĺžila čas potrebný na úplné uzavretie rany približne o 50 % bez ovplyvnenia proliferácie, migrácie jednotlivých buniek alebo proteolytickej aktivity, čím sa potvrdila špecifická úloha komunikácie cez medzerové spojenia pri koordinovanej endoteliálnej reparácii rán.

Sekrécia neurotrofických faktorov a aplikácie kmeňových buniek

Bunky bEnd.3 vylučujú neurotrofické faktory, ktoré pôsobia na okolité neurálne mikroprostredie. Wang a spolupracovníci preukázali, že neurotrofický faktor pochádzajúci z mozgu (BDNF) je exprimovaný a uvoľňovaný bunkami bEnd.3, pričom sekréciu BDNF stimuluje ako trvalá, tak aj intermitentná hypoxia — pričom intermitentná hypoxia je silnejším stimulom [27]. Uvoľňovanie BDNF vyvolané hypoxiou bolo čiastočne inhibované N-acetyl-L-cysteínom a mimetikom superoxiddismutázy, čo naznačuje účasť reaktívnych foriem kyslíka na neurotrofickej signalizácii riadenej hypoxiou a vyžadovalo mobilizáciu vápnika z vnútorných zásob. Tieto zistenia potvrdili, že mikrovaskulárny endotélium mozgu sa aktívne podieľa na prežití neurónov a nie je iba pasívnou bariérou.

Najpozoruhodnejšie je, že Joubin a kolegovia preukázali, že bunky bEnd.3 udržujú ľudské pluripotentné kmeňové bunky v nediferencovanom stave tým, že vylučujú rozpustnú látku, ktorá napodobňuje mikroprostredie poskytované embryonálnymi fibroblastami myší [4]. Autori ďalej preukázali, že bunky bEnd.3 možno geneticky modifikovať tak, aby exprimovali fluorescenčné reportéry alebo gény rezistencie voči liekom, čím vznikajú špeciálne navrhnuté podporné vrstvy pre kultiváciu kmeňových buniek – ide o aplikáciu, ktorá výrazne rozširuje využiteľnosť tejto bunkovej línie nad rámec klasického endoteliálneho výskumu.

Záver

bEnd.3 zostáva jednou z najuniverzálnejších a najproduktívnejších bunkových línií vo výskume neurovaskulárneho systému a hematoencefalickej bariéry (BBB). Od modelovania ischemickej cievnej mozgovej príhody a reperfúzneho poškodenia až po analýzu signalizácie eNOS, hojenie rán sprostredkované konnexínmi, expresiu angiogénnych génov a narušenie tesných spojení spôsobené autofágiou – táto myšia mikrovaskulárna endoteliálna bunková línia prispela k poznatkom v mnohých biomedicínskych disciplínach. Jej použiteľnosť pri skúmaní otázok týkajúcich sa Alzheimerovej choroby, traumatických poranení mozgu a skríningu neuroprotektívnych látok ďalej upevňuje jej miesto v súbore nástrojov neurovedeckého výskumu – za predpokladu, že sa v experimentálnom návrhu zohľadní jej obmedzená tesnosť bariéry a transformovaný fenotyp. Výskumníkom, ktorí hľadajú dobre charakterizovaný, reprodukovateľný a experimentálne zvládnuteľný in vitro model endotelu a transportu cez hematoencefalickú bariéru, odporúčame preskúmať bunky Bend.3 dostupné na stránke cytion.com, kde sú uvedené úplné špecifikácie produktu a informácie o objednávaní.

Kľúčové publikácie

1. Montesano R, Pepper MS, Möhle-Steinlein U, et al. (1990) Zvýšená proteolytická aktivita je zodpovedná za abnormálne morfogenetické správanie endoteliálnych buniek exprimujúcich onkogén middle T. Cell 62:435–445. PMID: 2379237
2. Omidi Y, Campbell L, Barar J, et al. (2003) Hodnotenie imortalizovanej línie endoteliálnych buniek kapilár myšieho mozgu, b.End3, ako in vitro modelu hematoencefalickej bariéry pre štúdie absorpcie a transportu liekov. Brain Research 990:95–112. PMID: 14568334
3. Yuen D, Leu R, Tse J, et al. (2014) Nová charakterizácia buniek bEnd.3, ktoré exprimujú hyaluronánový receptor-1 endotelu lymfatických ciev. Lymphology 47:73–81. PMID: 25282873
4. Joubin K, Richardson A, Novoa N, et al. (2012) Endoteliálna bunková línia bEnd.3 udržiava ľudské pluripotentné kmeňové bunky. Stem Cells and Development 21:2312–2321. PMID: 22224974
5. Song L, Pachter JS (2003) Kultivácia mikrovaskulárnych endoteliálnych buniek myšieho mozgu, ktoré zachovávajú expresiu a cytoskeletálnu asociáciu proteínov spojených s tesnými spojmi. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal 39:313–320. PMID: 14613336
6. Koto T, Takubo K, Ishida S, et al. (2007) Hypoxia narúša bariérovú funkciu neurálnych krvných ciev prostredníctvom zmien v expresii claudínu-5 v endoteliálnych bunkách. The American Journal of Pathology 170:1389–1397. PMID: 17392177
7. Kim KA, Kim D, Kim JH, et al. (2020) Degradácia okludínu sprostredkovaná autofágiou prispieva k narušeniu hematoencefalickej bariéry počas ischémie v mozgových endoteliálnych bunkách bEnd.3 a v modeloch ischemickej cievnej mozgovej príhody u potkanov. Fluids and Barriers of the CNS 17:21. PMID: 32169114
8. Yang MZ, Mun CH, Choi YJ, et al. (2007) Agmatín inhibuje matrixovú metaloproteinázu-9 prostredníctvom endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého v mozgových endoteliálnych bunkách. Neurological Research 29:749–754. PMID: 17588309
9. Xie YY, Lu YW, Yu GR (2022) Ochranné účinky hyperozidu na apoptózu buniek bEnd.3 sprostredkovanú Ang II a poškodenie modelu hematoencefalickej bariéry in vitro. BMC Complementary Medicine and Therapies 22:157. PMID: 35698113
10. Cheng YQ, Wu CR, Du MR, et al. (2022) CircLphn3 chráni hematoencefalickú bariéru pri traumatickom poranení mozgu. Neural Regeneration Research 17:812–818. PMID: 34472480
11. Jeong EM, Moon CH, Kim CS a kol. (2004) Kadmium stimuluje expresiu ICAM-1 prostredníctvom aktivácie NF-kappaB v cerebrovaskulárnych endoteliálnych bunkách. Biochemical and Biophysical Research Communications 320:887–892. PMID: 15240131
12. Zhang J, Rui YC, Yang PY, et al. (2006) C-reaktívny proteín indukoval expresiu adhéznych molekúl v kultivovaných mikrovaskulárnych endoteliálnych bunkách mozgu. Life Sciences 78:2983–2988. PMID: 16412476
13. Jung YS, Kim CS, Park HS a kol. (2003) N-nitrosokarbofurán indukuje apoptózu v mikrovaskulárnych endoteliálnych bunkách mozgu myší (bEnd.3). Journal of Pharmacological Sciences 93:489–495. PMID: 14737022
14. Tsai TY, Leong IL, Cheng KS, et al. (2019) Cytotoxicita indukovaná lyzofosfatidylcholínom a ochrana heparínom v endoteliálnych bunkách mozgu myší bEND.3. Fundamental & Clinical Pharmacology 33:52–62. PMID: 29974515
15. Hu D, Shen Z, Hou X, et al. (2025) Remodelácia aktínu sprostredkovaná ROCK prispieva k zníženej proliferácii a migrácii endoteliálnych buniek bEnd.3 ošetrených florfenikolom. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology 39:e70453. PMID: 40826991
16. Chan Y, Chen W, Chen Y a kol. (2020) Prípravok Yi-Zhi-Fang-Dai má ochranný účinok proti poškodeniu proteínov tvoriacich kostru tesných spojení in vitro aj in vivo prostredníctvom regulácie autofágie cez signálnu dráhu RAGE/CaMKKβ/AMPK/mTOR. Biological & Pharmaceutical Bulletin 43:1847–1858. PMID: 33268702
17. Xiong R, Zhou XG, Tang Y, a kol. (2021) Polyfenol zo semien liči chráni hematoencefalickú bariéru tým, že inhibuje aktiváciu inflamazómu NLRP3 indukovanú Aβ(25-35) prostredníctvom autofágie sprostredkovanej dráhou AMPK/mTOR/ULK1 v bunkách bEnd.3 a u myší APP/PS1. Phytotherapy Research 35:954–973. PMID: 32893437
18. Ma C, Ye Y, Shi X a kol. (2025) Fotobiomodulácia zmierňuje narušenie hematoencefalickej bariéry v myším modeli Alzheimerovej choroby APP/PS1 aktiváciou dráhy AMPK. Alzheimer's Research & Therapy 17:141. PMID: 40551167
19. Yue F, Zhang GP, Jin HM (2006) Vplyv bazického fibroblastového rastového faktora na expresiu profilu angiogénnych génov a cyklooxygenázy-2 v mikrovaskulárnych endoteliálnych bunkách mozgu. Sheng Li Xue Bao 58:124–128. PMID: 16628358
20. Zhu Y, Sun Y, Xie L, et al. (2003) Hypoxická indukcia endoglinu prostredníctvom mitogénom aktivovaných proteínkináz v mikrovaskulárnych endoteliálnych bunkách mozgu myší. Stroke 34:2483–2488. PMID: 12947156
21. Li X, Zhou T, Zhi X, et al. (2006) Vplyv hypoxie/reoxygenácie na CD73 (ekto-5'-nukleotidázu) v bunkových líniách endotelu mikrociev myší. Microvascular Research 72:48–53. PMID: 16828810
22. Shi LG, Zhang GP, Jin HM (2006) Inhibícia apoptózy mikrovaskulárnych endoteliálnych buniek angiopoetínom-1 a úloha cytochrómu C. Chinese Medical Journal 119:725–730. PMID: 16701012
23. Perry BN, Govindarajan B, Bhandarkar SS a kol. (2006) Farmakologická blokáda angiopoetínu-2 je účinná proti modelovým hemangiómom u myší. The Journal of Investigative Dermatology 126:2316–2322. PMID: 16741507
24. Govers R, Bevers L, de Bree P, et al. (2002) Aktivita endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého súvisí s jej prítomnosťou na miestach medzibunkových kontaktov. The Biochemical Journal 361:193–201. PMID: 11772391
25. Bevers LM, Braam B, Post JA a kol. (2006) Tetrahydrobiopterín, na rozdiel od L-arginínu, znižuje odpojenie syntázy NO v bunkách exprimujúcich vysoké hladiny endoteliálnej syntázy NO. Hypertension 47:87–94. PMID: 16344367
26. Kwak BR, Pepper MS, Gros DB a kol. (2001) Inhibícia endoteliálnej reparácie rán dominantne negatívnymi inhibítormi konnexínov. Molecular Biology of the Cell 12:831–845. PMID: 11294890
27. Wang H, Ward N, Boswell M, et al. (2006) Sekrécia neurotrofického faktoru pochádzajúceho z mozgu z mikrovaskulárnych endoteliálnych buniek mozgu. The European Journal of Neuroscience 23:1665–1670. PMID: 16553631