Uvod

Ta Bend.3 Celice Linija — znana tudi pod sinonimi bEND.3, b.End3, bEnd3, BEND-3, BEND3 in »brain-derived Endothelial cells.3« — je transformirana linija mikrovaskularnih endotelijskih celic mišjega možganov, ki je postala eno najpogosteje uporabljanih in vitro orodij v nevrovaskularni biologiji. Linija je bila vzpostavljena iz tkiva mišjega možganskega endotelioma po transformaciji s srednjim T-antigenom poliomavirusa, kar ji zagotavlja stabilno in neomejeno sposobnost proliferacije ob ohranjanju ključnih endotelijskih lastnosti. Od svoje karakterizacije v zgodnjih 90. letih 20. stoletja bEnd.3 služi kot dostopen in ponovljiv nadomestek za preučevanje krvno-možganske pregrade (BBB), možganske ishemije, kapi, poškodbe zaradi reperfuzije, angiogeneze ter širše biologije endotelijskih celic. Njegova uporabnost pri modeliranju motenj BBB v okviru ishemične kapi, Alzheimerjeve bolezni in travmatske poškodbe možganov je iz njega naredila široko sprejeto orodje tako v temeljnih kot v translacijskih nevroznanstvenih raziskavah.

Ključne ugotovitve

• bEnd.3 je transformirana linija mikrovaskularnih endotelijskih celic mišjih možganov, pridobljena iz možganskega tkiva miši pasme BALB/c in transformirana s srednjim T-antigenom poliomavirusa (Cellosaurus, številka dostopa CVCL_0170).
• Široko se uporablja kot in vitro model krvno-možganske pregrade za raziskovanje ishemične kapi, poškodb zaradi reperfuzije, Alzheimerjeve bolezni in nevrovnetja.
• Celice izražajo ključne markerje, povezane z krvno-možgansko pregrado (BBB), vključno s proteini tesnih spojev – claudinom-5, okludinom in ZO-1 – ter eNOS in PECAM-1.
• Celice bEnd.3 izražajo markerje limfatičnega endotelija, kot sta LYVE-1 in VEGFR-3, kar širi njihov pomen za raziskave na področju vaskularne biologije.
• Čas podvojitve te celične linije znaša 26–30 ur, zaradi česar je primerna za eksperimentalno delo v velikem obsegu.
• Neprpustnost pregrade je omejena: največja transendotelijska električna upornost v višini približno 130 Ω·cm² je bila dosežena le v sobni kulturi astrogličnih celic, ta merilna krivulja pa slabo razlikuje med markerji paracelularne in transcelularne prepustnosti.
• Dokazano je, da celice bEnd.3 kot podpornice omogočajo vzdrževanje človeških pluripotentnih izvornih celic, s čimer se širijo njihove možnosti uporabe v biologiji izvornih celic.

Kaj je bEnd.3?

bEnd.3 je bil pridobljen iz možganskega tkiva 6-tedenske miši pasme BALB/c neznanega spola (Cellosaurus, številka vzorca CVCL_0170). Izvorne endotelijske celice so bile pridobljene s transformacijo mišjih endotelijskih celic z antigenom srednjega T (mT) poliomavirusa. V prelomni študiji iz leta 1990, ki so jo opravili Montesano, Pepper in sodelavci, je bilo dokazano, da celice endotelioma, ki izražajo mT, kažejo izrazito povečano proteolitično aktivnost – zlasti povišano raven aktivatorja plazminogena tipa urokinaze skupaj z zmanjšano proizvodnjo zaviralca aktivatorja plazminogena — ter tvorijo velike cistične strukture, podobne hemangiomom, znotraj fibrinskih gelov, kar pojasnjuje globoko motnjo normalnega razvoja žil, ki jo povzroča onkogen [1]. Ta mehanistična podlaga je pomagala opredeliti spremenjeni fenotip, na katerem temelji biološko obnašanje in uporabnost bEnd.3 v eksperimentalnih pogojih.

Nadaljnje karakterizacijske raziskave so podrobno opredelile morfološki in molekularni profil te celične linije. Omidi in sodelavci so poročali, da celice bEnd.3 v kulturi kažejo značilno vretenasto skvamozno morfologijo ter izražajo proteine, povezane z veziklami, vključno s klatrinom, kaveolinom-1, flotilinom in dinaminom II, kar je skladno z aktivnim mehanizmom vezikularnega prometa [2]. Ista študija je potrdila prisotnost transkriptov za elemente tesnih spojev ZO-1, JAM, okludin, klaudin-1 in klaudin-5, pa tudi funkcionalni vnos glukoze, posredovan s GLUT-1, in izločanje prek P-glikoproteina. V kokulturi z astroglijo C6 so monosloji dosegli največji transendotelijski električni upor približno 130 Ω·cm², čeprav so avtorji ugotovili tudi, da celice niso pomembno razlikovale med paracelularnimi in transcelularnimi sondami za prepustnost. Yuen in sodelavci so kasneje poročali, da celice bEnd.3 izražajo tudi limfatične endotelijske markerje LYVE-1 in VEGFR-3 ter markerje progenitornih celic Sca-1 in CD133, in ob stimulaciji s TNF-alfa tvorijo kapilarne cevi – odkritje, ki je razširilo biološki pomen te celične linije preko okvirov klasičnega raziskovanja krvnih žil [3].

Prednosti programa bEnd.3

Ena od najpomembnejših prednosti linije bEnd.3 je njena dostopnost in praktična reproduktivnost. Za razliko od primarnih mikrovaskularnih endotelijskih celic možganov, ki zahtevajo zahtevne postopke izolacije in imajo omejeno zmogljivost za pasiranje, je bEnd.3 nesmrtena linija, ki jo je mogoče zanesljivo razmnoževati v različnih laboratorijih. S časom podvojitve 26–30 ur so celice zelo primerne za poskuse, ki zahtevajo veliko število enotnih celic. Njihova stabilna ekspresija endotelijskih markerjev — vključno s proteini tesnih spojev, kot so claudin-5, okludin in ZO-1 ter eNOS in PECAM-1 – jih naredi praktičen nadomestek za mikrovaskularni endotel možganov v širokem spektru eksperimentalnih pogojev, pod pogojem, da se upoštevajo opozorila glede pregradne funkcije, opisana v nadaljevanju.

Vsestranskost linije bEnd.3 sega v številne raziskovalne discipline. V študijah so to linijo uporabili za modeliranje motenj krvno-možganske pregrade med ishemično kapi in poškodbo zaradi reperfuzije, za preučevanje nevrovnetja, ki ga sprožajo adhezijske molekule, za profiliranje izražanja angiogenih genov ter za raziskovanje medcelične komunikacije, ki jo posredujejo koneksini. Poleg tega so Joubin in sodelavci dokazali, da lahko celice bEnd.3 ohranjajo človeške pluripotentne izvorne celice v nediferenciranem stanju, pri čemer delujejo kot podporne celice, ki jih je mogoče genetsko spremeniti – to je zmožnost, ki je pri kratkoživih primarnih kulturah težko ponovljiva. [4]. Ta širok spekter uporabe kaže na uporabnost te celične linije na področjih nevroznanosti, vaskularne biologije, farmakologije in raziskav matičnih celic.

Omejitve programa bEnd.3

Kljub široki uporabi ima bEnd.3 pomembne omejitve, ko se uporablja kot model krvno-možganske pregrade. Omidi in sodelavci so izmerili največji transendotelijski električni upor le okoli 130 Ω·cm², pri čemer je bila za dosego te vrednosti potrebna sobna kultura z astroglijskimi celicami C6; še pomembneje pa je, da so monosloji pokazali le majhno razliko med transcelularnimi in paracelularnimi sondami, pri čemer so se koeficienti prepustnosti za propranolol in saharozo razlikovali le neznatno [2]. Avtorji so ugotovili, da ta linija ni primerna za ocenjevanje transendotelijske prepustnosti, ostaja pa koristna za raziskave transportnih mehanizmov krvno-možganske pregrade. Podatke o prepustnosti, pridobljene v tem sistemu, je zato treba razlagati previdno in jih, kjer je to mogoče, dopolniti s sistemi sobivanja celic ali z validacijo in vivo.

Sama organizacija tesnih spojev predstavlja sorodno slabost. Song in Pachter sta primerjala bEnd.3 s sveže prečiščenimi primarnimi mikrovaskularnimi endotelijskimi celicami mišjih možganov in ugotovila, da so primarne celice kludin-5, okludin in ZO-1 koncentrirale vzdolž medceličnih mej ter okludin in ZO-1 ločile z detergentno odpornim citoeskeletnim ogrodjem, so celice bEnd.3 kazale difuzno citoplazmatsko lokalizacijo okludina in ZO-1 ter te proteine zadrževale pretežno v topni frakciji [5]. Izražanje beljakovine tesnih spojev v bEnd.3 torej samo po sebi še ne pomeni, da je sestava spojev pravilna.

Spremenjena narava bEnd.3, ki izhaja iz ekspresije onkogena mT, lahko povzroči tudi fenotipne artefakte, ki jih v normalnem možganskem endoteliju ni. Povečana proteolitična aktivnost — značilna lastnost celic endotelioma, ki izražajo mT [1] — izražanje limfatičnih markerjev, kot sta LYVE-1 in VEGFR-3, pa kaže, da ta celična linija ne odraža v celoti normalnega endotelija krvnih žil [3]. Poleg tega spol donatorja za to celično linijo ni naveden, kar omejuje uporabnost ugotovitev pri raziskovalnih vprašanjih, razčlenjenih po spolu. Ti vidiki sicer ne zmanjšujejo vrednosti celične linije, vendar poudarjajo pomen razumevanja njenega specifičnega biološkega konteksta.

Oglejte si celotne tehnične podatke in oddajte naročilo

Uporaba

Modeliranje krvno-možganske pregrade in ishemični možganski kapi

Najpomembnejša uporaba bEnd.3 je kot in vitro model krvno-možganske pregrade v ishemičnih in postishemičnih pogojih. Koto in sodelavci so dokazali, da je hipoksija (1 % O₂) spremenila lokalizacijo in raven beljakovine claudin-5 v monoslojih bEnd.3, kar je povzročilo merljivo zmanjšanje transendotelijske električne upornosti, ter potrdili ustrezno izgubo claudin-5 v mikrovaskularnem endoteliju mrežnice in vivo [6]. S tem je bila vzpostavljena mehanistična povezava med preoblikovanjem tesnih spojev in porušitvijo pregrade med nevralno hipoksijo, linija bEnd.3 pa se je uveljavila kot primeren sistem za preučevanje molekularnih dogodkov, ki so osnova za odpoved krvno-možganske pregrade pri kapi.

V pogosto citirani študiji so Kim in sodelavci to celično linijo uporabili kot in vitro model BBB, izpostavljen pomanjkanju kisika in glukoze (OGD), da bi simulirali ishemijo. Osemnajst ur OGD je povzročilo celično disfunkcijo, povečano prepustnost, razgradnjo okludina in aktivacijo avtofagijskih poti, pri čemer se je razgrajeni okludin kolokaliziral z ishemičnimi avtofagozomi; tako izguba okludina kot sprememba prepustnosti sta se z zaviralcem avtofagije 3-metiladeninom znatno zmanjšali. Enake molekularne spremembe in njihovo povratno delovanje pod vplivom 3-metiladenina so bile naknadno ponovno ugotovljene v možganskih kapilarah pri podganah, pri katerih je bila izvedena okluzija srednje možganske arterije [7]. To delo je vzpostavilo mehanistični okvir, ki povezuje avtofagični pretok z izgubo proteinov tesnih spojev, ter zagotovilo pomembne translacijske vpoglede v patologijo možganske kapi.

Dopolnilne raziskave so pokazale, da agmatin zmanjšuje izražanje matriksnih metaloproteinaz-2 in -9 v možganskih endotelijskih celicah — vključno s celicami bEnd.3 —, ki so bile izpostavljene poškodbi zaradi pomanjkanja kisika in glukoze (OGD) ter reperfuzije, pri čemer je zmanjšanje izražanja MMP-9 potekalo vzporedno s povečanjem izražanja eNOS in ohranjanjem sproščanja dušikovega oksida, kar ponuja potencialen nevroprotektivni mehanizem, pomemben pri poškodbah možganov in poškodbah zaradi reperfuzije [8]. Študije o apoptozi, posredovani z Ang II, so nadalje pokazale, da hiperosid ščiti celice bEnd.3 in ohranja celovitost monosloja krvno-možganske pregrade (BBB) in vitro, pri čemer deluje na JAM-A, claudin-5, ZO-1, caveolin-1 in Mfsd2a ter nakazuje terapevtske možnosti za zaščito možganskih žil [9]. Raziskave o prekomerni ekspresiji circLphn3 v celicah bEnd.3 so prav tako poudarile vlogo nekodirajoče RNA pri ohranjanju ekspresije beljakovin tesnih spojev – vključno z ZO-1, ZO-2 in okludin – po travmatični poškodbi možganov, pri čemer circLphn3 deluje kot molekularna goba za miR-185-5p [10].

Nevrovnetje, endotelijska toksikologija in Alzheimerjeva bolezen

Celice bEnd.3 so se obsežno uporabljale za preučevanje vnetnih signalov na cerebrovaskularnem endoteliju. Jeong in sodelavci so pokazali, da kadmij – povsod prisotna težka kovina, ki se kopiči zunaj krvno-možganske pregrade (BBB) – stimulira izražanje ICAM-1 v celicah bEnd.3 prek aktivacije NF-κB, ki jo poganja tirozinska fosforilacija IκBα in ne njegova degradacija, s čimer so zagotovili mehanistično podlago za kadmijem povzročeno cerebrovaskularno toksičnost [11]. Podobno so Zhang in sodelavci poročali, da je C-reaktivni protein v koncentracijah 1–75 mg/L povečal izražanje ICAM-1 in VCAM-1 ter uhajanje LDH v celicah bEnd.3, kar kaže na neposredno vlogo tega proteina akutne faze pri poškodbi krvno-možganske pregrade med ishemično kapi [12].

V tej celični liniji so preučevali tudi toksičnost endotelija, ki jo povzročajo pesticidi. Jung in sodelavci so pokazali, da je N-nitrosokarbofuran, nitrozometabolit karbamatnega pesticida karbofurana, v celicah bEnd.3 povzročil apoptozo prek poti MAP kinaze, pri čemer je pri celični smrti prevladujočo vlogo igrala pot ERK [13]. Citotoksičnost, ki jo povzroča lizofosfatidilholin v celicah bEnd.3, so preučevali Tsai in sodelavci, ki so celično smrt pripisali preobremenitvi citosola s kalcijem, izgubi mitohondrijskega membranskega potenciala, aktivacijo p38 ter aktivacijo kaspaze-3 — zlasti brez nastajanja reaktivnih kisikovih spojin — ter so kot zaščitno sredstvo, ki deluje v smeri navzdol od p38, identificirali heparin [14]. Novejše raziskave o zdravljenju s florfenikolom so dokumentirale preoblikovanje F-aktina, posredovano s ROCK/cofilinom, ki prispeva k zmanjšani proliferaciji in migraciji v endotelnih celicah bEnd.3 [15].

Na področju raziskav Alzheimerjeve bolezni so celice bEnd.3 služile kot model za motnjo krvno-možganske pregrade, ki jo posreduje amiloidni beta peptid. Chan in sodelavci so pokazali, da so spremembe avtofagije v celicah bEnd.3, ki jih povzročajo Aβ-oligomeri, blokirale majhne interferenčne RNA RAGE, kar povezuje signalizacijo RAGE prek osi CaMKKβ/AMPK/mTOR z avtofagijsko odvisno poškodbo beljakovin ogrodja tesnih spojev ZO-1, okludina in klaudina-5 [16]. Ločeno od tega je bilo dokazano, da polifenol iz semen liči ščiti celovitost krvno-možganske pregrade z zaviranjem aktivacije inflammasoma NLRP3, ki jo inducira Aβ(25–35), prek poti avtofagije, posredovane z AMPK/mTOR/ULK1 v celicah bEnd.3; rezultati so bili potrjeni na transgenih miših APP/PS1 transgenih miših – študija, ki je poglobila razumevanje medsebojnega vpliva avtofagije in inflammasoma na nevrovaskularnem stiku [17]. Fotobiomodulacija je bila preučena v istem kontekstu: Ma in sodelavci so z uporabo celic bEnd.3, stimuliranih z LPS, ter miši APP/PS1 pokazali, da zdravljenje z bližnjo infrardečo svetlobo izboljša mitohondrijski energetski metabolizem, poveča izražanje okludina, klavdina-5 in ZO-1 ter ščiti celovitost pregrade na način, odvisen od AMPK [18].

Angiogeneza in vaskularno signaliziranje

bEnd.3 se je izkazal za zelo informativnega v študijah angiogenega signaliziranja. Yue in sodelavci so z uporabo cDNA mikročipa profilirali ekspresijo angiogenih genov v celicah bEnd.3, obdelanih z bazičnim fibroblastnim rastnim faktorjem (bFGF), in ugotovili povečano ekspresijo proangiogenih genov, vključno z ADAMTS1, MMP-9, angiopoietin-1, PDGF-B in G-CSF, zmanjšano izražanje antiangiogenih genov, kot sta TIMP-2 in TSP-3, ter indukcijo ciklooksigenaze-2 (COX-2) tako na ravni mRNA kot na ravni beljakovin [19]. Ta visoko zmogljiv pristop je potrdil, da so celice bEnd.3 primerna platforma za profiliranje angiogeneze na ravni genoma.

Z uporabo celic bEnd.3 so bili kartirani tudi angiogeni odzivi, ki jih povzroča hipoksija. Zhu in sodelavci so dokazali, da hipoksija poveča ekspresijo mRNA in beljakovin endoglina (CD105) v celicah bEnd.3 prek aktivacije p38 MAPK, pri čemer zaviralci te poti – in dominantno negativni MKK3 – zavirajo indukcijo endoglina [20]. Ker je endoglin mutiran pri dedni hemoragični telangiektaziji in se njegova ekspresija poveča med aktivno angiogenezo, so ti izsledki povezali na hipoksijo občutljivo signalizacijo MAPK s patološkim preoblikovanjem žil. Li in sodelavci so nadalje pokazali, da hipoksija na časovno odvisen način poveča aktivnost CD73 (ekto-5'-nukleotidaze), mRNA in beljakovine v celicah bEnd.3 na časovno odvisen način, medtem ko je reoksigenacija sprva to indukcijo odpravila, preden se je raven CD73 ob podaljšani reoksigenaciji ponovno povečala – kar kaže na nastajanje adenozina kot nevrozaščitnega mehanizma med ishemijo-reperfuzijo [21].

Signalizacija angiopoietina je bila podrobno proučena z uporabo bEnd.3 kot modelnega sistema. Shi in sodelavci so v celicah bEnd.3 vzpostavili model apoptoze brez seruma in dokazali, da angiopoietin-1 zavira apoptozo mikrovaskularnih endotelijskih celic prek mehanizma, ki vključuje zmanjšanje Baxa, povečanje Bcl-2 in zmanjšano sproščanje citokroma C iz mitohondrijev v citoplazmo [22]. Perry in sodelavci so biologijo angiopoietina razširili na raziskave hemangiomov, pri čemer so dokazali konstitutivno aktivacijo receptorja Tie-2 v človeškem hemangiomu v dojenčkovem obdobju ter uporabili celice bEnd.3 kot mišji modelni sistem za hemangiom, v katerem je farmakološka zavora proizvodnje angiopoietina-2 skoraj povsem ustavila rast tumorja in vivo [23].

eNOS, koneksini in endotelijska funkcija

Biologija endotelne sintaze dušikovega oksida (eNOS) je bila v celicah bEnd.3 opisana z znatno natančnostjo. Govers in sodelavci so z imunofluorescenčno mikroskopijo pokazali, da je lokalizacija eNOS na plazemski membrani odločilno odvisna od stika med celicami, pri čemer je opazno močno obogatitev na mestih medceličnega stika, ki bolj spominja na vzorec porazdelitve PECAM-1 kot na vzorec VE-kadherina ali plakoglobina, aktivnost eNOS pa je višja v konfluentnih kot v subkonfluentnih monoslojih, kljub nespremenjeni ekspresiji [24]. Ta prostorska povezanost med lokalizacijo eNOS in njeno aktivnostjo je izpostavila celice bEnd.3 kot model, v katerem je mogoče smiselno preučevati fiziološki kontekst konfluentnega endotelija.

Bevers in sodelavci so preučevali razvezo eNOS v celicah bEnd.3, ki izražajo eNOS na ravneh, ki so za več kot dva redova velikosti višje od tistih v primerjalni endotelijski liniji, hkrati pa nimajo iNOS in nNOS. Ugotovili so, da je dodajanje tetrahidrobiopterina (BH4) povečalo proizvodnjo NO in zmanjšalo nastajanje reaktivnih kisikovih spojin, medtem ko je dodajanje dodatnega L-arginina še dodatno povečalo VEGF-inducirane ROS – kar kaže, da v tem primeru razvezavo povzroča relativni primanjkljaj BH4, ne pa razpoložljivost arginina [25]. Ta rezultat ima neposreden pomen za vaskularne zaplete pri boleznih, kot sta hipertenzija in ateroskleroza, kjer lahko trajna prekomerna ekspresija eNOS paradoksalno spodbuja oksidativni stres.

V celicah bEnd.3 so preučevali tudi komunikacijo prek vrzelnih spojev, ki jo posreduje koneksin. Kwak in sodelavci so primerjali izražanje koneksina in medcelično povezovanje pred in po mehanski poškodbi monosloj bEnd.3 ter opazili, da je poškodba povzročila povečano izražanje Cx43 in zmanjšano izražanje Cx37 na mestu poškodbe, medtem ko Cx40 ni bil prizadet [26]. Stabilna transfekcija z dominantno negativnimi zaviralci koneksinov je podaljšala čas, potreben za popolno zaprtje rane, za približno 50 %, ne da bi spremenila proliferacijo, migracijo posameznih celic ali proteolitično aktivnost, s čimer je bila ugotovljena specifična vloga komunikacije prek medceličnih stikov pri usklajenem popravljanju endotelijskih ran.

Izločanje nevrotrofičnih faktorjev in uporaba v raziskavah matičnih celic

Celice bEnd.3 izločajo nevrotrofične faktorje, ki delujejo na okoliško nevralno mikrookolje. Wang in sodelavci so pokazali, da celice bEnd.3 izražajo in izločajo nevrotrofični faktor iz možganov (BDNF), pri čemer izločanje BDNF spodbujata tako trajna kot prekinjena hipoksija – pri čemer je prekinjena hipoksija močnejši dražljaj [27]. Izločanje BDNF, ki ga povzroča hipoksija, je bilo delno zavrto z N-acetil-L-cisteinom in z mimetikom superoksid dismutaze, kar kaže na vpletenost reaktivnih kisikovih spojin v nevrotrofično signalizacijo, ki jo povzroča hipoksija, in je zahtevalo mobilizacijo kalcija iz notranjih zalog. Te ugotovitve so potrdile, da je mikrovaskularni endotel možganov aktiven udeleženec v preživetju nevronov, ne le pasivna pregrada.

Najbolj presenetljivo je, da so Joubin in sodelavci pokazali, da celice bEnd.3 ohranjajo človeške pluripotentne izvorne celice v nediferenciranem stanju, pri čemer izločajo topno snov, ki posnema nišo, ki jo zagotavljajo mišji embrionalni fibroblasti [4]. Avtorji so nadalje dokazali, da je mogoče celice bEnd.3 genetsko spremeniti tako, da izražajo fluorescenčne markerje ali gene za odpornost proti zdravilom, s čimer ustvarjajo po meri zasnovane podlage za gojenje izvornih celic – to je uporaba, ki znatno razširi uporabnost te celične linije prek meja klasičnih raziskav endotelija.

Zaključek

bEnd.3 ostaja ena izmed najbolj vsestranskih in produktivnih celičnih linij v raziskavah nevrovaskularnega sistema in krvno-možganske pregrade. Od modeliranja ishemične kapi in poškodb zaradi reperfuzije do raziskovanja signalizacije eNOS, popravljanja ran s pomočjo koneksinov, ekspresije angiogenih genov in motenj tesnih spojev, ki jih povzroča avtofagija, je ta linija mikrovaskularnih endotelijskih celic mišjega možgana prispevala k spoznanjem v številnih biomedicinskih disciplinah. Njena uporabnost pri raziskovanju Alzheimerjeve bolezni, travmatskih poškodb možganov in presejanja nevroprotektivnih sredstev še dodatno utrjuje njen položaj v naboru orodij za nevroznanstvene raziskave – pod pogojem, da se v eksperimentalnem načrtu upoštevata njena omejena neprepustnost pregrade in spremenjeni fenotip. Raziskovalce, ki iščejo dobro opredeljen, ponovljiv in eksperimentalno obvladljiv in vitro model endotelijskih celic in transporta skozi krvno-možgansko pregrado, spodbujamo, da si ogledajo celice Bend.3, ki so na voljo na spletni strani cytion.com, kjer so navedene tudi popolne specifikacije izdelka in informacije o naročanju.

Ključne publikacije

1. Montesano R, Pepper MS, Möhle-Steinlein U, et al. (1990) Povečana proteolitična aktivnost je odgovorna za nenormalno morfogenetsko vedenje endotelijskih celic, ki izražajo onkogen middle T. Cell 62:435–445. PMID: 2379237
2. Omidi Y, Campbell L, Barar J, et al. (2003) Ocena imortalizirane linije kapilarnih endotelijskih celic mišjih možganov, b.End3, kot in vitro modela krvno-možganske pregrade za študije absorpcije in transporta zdravil. Brain Research 990:95–112. PMID: 14568334
3. Yuen D, Leu R, Tse J, et al. (2014) Nova karakterizacija celic bEnd.3, ki izražajo hialuronanski receptor-1 endotelijskih celic limfatičnih žil. Lymphology 47:73–81. PMID: 25282873
4. Joubin K, Richardson A, Novoa N, et al. (2012) Endotelijska celična linija bEnd.3 ohranja človeške pluripotentne izvorne celice. Stem Cells and Development 21:2312–2321. PMID: 22224974
5. Song L, Pachter JS (2003) Kultiviranje mikrovaskularnih endotelijskih celic mišjih možganov, ki ohranjajo ekspresijo in povezavo s citoeskeletom beljakovin, povezanih s tesnimi spojmi. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal 39:313–320. PMID: 14613336
6. Koto T, Takubo K, Ishida S, et al. (2007) Hipoksija moti barierno funkcijo nevralnih krvnih žil prek sprememb v izražanju klavdina-5 v endotelnih celicah. The American Journal of Pathology 170:1389–1397. PMID: 17392177
7. Kim KA, Kim D, Kim JH, et al. (2020) Razgradnja okludina, posredovana z avtofagijo, prispeva k motnji krvno-možganske pregrade med ishemijo v možganskih endotelijskih celicah bEnd.3 in modelih ishemične kapi pri podganah. Fluids and Barriers of the CNS 17:21. PMID: 32169114
8. Yang MZ, Mun CH, Choi YJ, et al. (2007) Agmatin zavira matriksno metaloproteinazo-9 prek endotelne sintaze dušikovega oksida v možganskih endotelnih celicah. Neurological Research 29:749–754. PMID: 17588309
9. Xie YY, Lu YW, Yu GR (2022) Zaščitni učinki hiperozida na Ang II-posredovano apoptozo celic bEnd.3 in poškodbo modela krvno-možganske pregrade in vitro. BMC Complementary Medicine and Therapies 22:157. PMID: 35698113
10. Cheng YQ, Wu CR, Du MR, et al. (2022) CircLphn3 ščiti krvno-možgansko pregrado pri travmatski poškodbi možganov. Neural Regeneration Research 17:812–818. PMID: 34472480
11. Jeong EM, Moon CH, Kim CS, et al. (2004) Kadmij stimulira izražanje ICAM-1 prek aktivacije NF-kappaB v cerebrovaskularnih endotelijskih celicah. Biochemical and Biophysical Research Communications 320:887–892. PMID: 15240131
12. Zhang J, Rui YC, Yang PY, et al. (2006) C-reaktivni protein je induciral izražanje adhezijskih molekul v gojenih mikrovaskularnih endotelnih celicah možganov. Life Sciences 78:2983–2988. PMID: 16412476
13. Jung YS, Kim CS, Park HS, et al. (2003) N-nitrozokarbofuran inducira apoptozo v mikrovaskularnih endotelijskih celicah mišjih možganov (bEnd.3). Journal of Pharmacological Sciences 93:489–495. PMID: 14737022
14. Tsai TY, Leong IL, Cheng KS, et al. (2019) Citotoksičnost, ki jo povzroča lizofosfatidilholin, in zaščita s heparinom v endotelnih celicah bEND.3 v možganih miši. Fundamental & Clinical Pharmacology 33:52–62. PMID: 29974515
15. Hu D, Shen Z, Hou X, et al. (2025) Preoblikovanje aktina, posredovano s sistemom ROCK, prispeva k zmanjšani proliferaciji in migraciji endotelijskih celic bEnd.3, obdelanih s florfenikolom. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology 39:e70453. PMID: 40826991
16. Chan Y, Chen W, Chen Y, et al. (2020) Formula Yi-Zhi-Fang-Dai ima zaščitni učinek na poškodbe beljakovin ogrodja tesnih spojev in vitro in in vivo, saj posreduje avtofagijo prek regulacije poti RAGE/CaMKKβ/AMPK/mTOR. Biological & Pharmaceutical Bulletin 43:1847–1858. PMID: 33268702
17. Xiong R, Zhou XG, Tang Y, in sod. (2021) Polifenol iz semen liči ščiti krvno-možgansko pregrado z zaviranjem aktivacije inflammasoma NLRP3, ki jo inducira Aβ(25–35), prek avtofagije, posredovane s potjo AMPK/mTOR/ULK1, v celicah bEnd.3 in miših APP/PS1. Phytotherapy Research 35:954–973. PMID: 32893437
18. Ma C, Ye Y, Shi X, in sod. (2025) Fotobiomodulacija blaži motnje krvno-možganske pregrade v mišjem modelu Alzheimerjeve bolezni APP/PS1 z aktiviranjem poti AMPK. Alzheimer's Research & Therapy 17:141. PMID: 40551167
19. Yue F, Zhang GP, Jin HM (2006) Učinki bazičnega rastnega faktorja fibroblastov na izražanje angiogenega genetske profila in ciklooksigenaze-2 v mikrovaskularnih endotelijskih celicah možganov. Sheng Li Xue Bao 58:124–128. PMID: 16628358
20. Zhu Y, Sun Y, Xie L, et al. (2003) Hipoksična indukcija endoglina prek mitogen-aktiviranih proteinskih kinaz v mikrovaskularnih endotelijskih celicah možganov miši. Stroke 34:2483–2488. PMID: 12947156
21. Li X, Zhou T, Zhi X, et al. (2006) Vpliv hipoksije/reoksigenacije na CD73 (ekto-5'-nukleotidazo) v linijah endotelnih celic mikrovaskulature miši. Microvascular Research 72:48–53. PMID: 16828810
22. Shi LG, Zhang GP, Jin HM (2006) Zaviranje apoptoze mikrovaskularnih endotelnih celic z angiopoietinom-1 in vloga citokroma C. Chinese Medical Journal 119:725–730. PMID: 16701012
23. Perry BN, Govindarajan B, Bhandarkar SS, et al. (2006) Farmakološka blokada angiopoietina-2 je učinkovita proti modelnim hemangiomom pri miših. The Journal of Investigative Dermatology 126:2316–2322. PMID: 16741507
24. Govers R, Bevers L, de Bree P, et al. (2002) Aktivnost endotelne sintaze dušikovega oksida je povezana z njeno prisotnostjo na stičnih mestih med celicami. The Biochemical Journal 361:193–201. PMID: 11772391
25. Bevers LM, Braam B, Post JA, et al. (2006) Tetrahidrobiopterin, ne pa L-arginin, zmanjšuje razvezavo NO-sintaze v celicah, ki izražajo visoke ravni endotelne NO-sintaze. Hypertension 47:87–94. PMID: 16344367
26. Kwak BR, Pepper MS, Gros DB, et al. (2001) Zaviranje popravljanja endotelijskih ran z dominantno negativnimi zaviralci koneksinov. Molecular Biology of the Cell 12:831–845. PMID: 11294890
27. Wang H, Ward N, Boswell M, et al. (2006) Izločanje nevrotrofičnega faktorja iz možganskih mikrovaskularnih endotelijskih celic. The European Journal of Neuroscience 23:1665–1670. PMID: 16553631