Introdução

O Células Bend.3 A linha — também conhecida pelos sinónimos bEND.3, b.End3, bEnd3, BEND-3, BEND3 e «células endoteliais derivadas do cérebro.3» — é uma linha celular de células endoteliais microvasculares do cérebro de ratinho transformadas que se tornou uma das ferramentas in vitro mais utilizadas na biologia neurovascular. A linha foi estabelecida a partir de tecido de endotelioma cerebral murino, na sequência da transformação com o antígeno T médio do vírus do polioma, uma manipulação que confere uma capacidade proliferativa estável e indefinida, preservando simultaneamente as principais características endoteliais. Desde a sua caracterização no início da década de 1990, a bEnd.3 tem servido como um substituto acessível e reprodutível para o estudo da barreira hematoencefálica (BHE), da isquemia cerebral, do acidente vascular cerebral, da lesão de reperfusão, da angiogénese e, de forma mais ampla, da biologia das células endoteliais. A sua utilidade na modelagem da ruptura da BHE no contexto do AVC isquémico, da doença de Alzheimer e da lesão cerebral traumática tornou-o uma ferramenta amplamente adotada tanto na investigação básica como na investigação translacional em neurociências.

Pontos-chave

• A bEnd.3 é uma linha celular de células endoteliais microvasculares do cérebro de ratinho transformada, derivada de tecido cerebral de ratinho BALB/c e transformada com o antígeno T médio do vírus do polioma (número de acesso Cellosaurus CVCL_0170).
• É amplamente utilizado como modelo in vitro da barreira hematoencefálica para o estudo do AVC isquémico, da lesão por reperfusão, da doença de Alzheimer e da neuroinflamação.
• As células expressam marcadores-chave associados à barreira hematoencefálica (BHE), incluindo as proteínas das junções estreitas claudina-5, oclusina e ZO-1, bem como eNOS e PECAM-1.
• As células bEnd.3 expressam marcadores endoteliais linfáticos, tais como LYVE-1 e VEGFR-3, o que alarga a sua relevância para a investigação em biologia vascular.
• A linha celular tem um tempo de duplicação de 26 a 30 horas, o que a torna eficiente para trabalhos experimentais em grande escala.
• A impermeabilidade da barreira é limitada: só na cocultura astroglial se atingiu uma resistência elétrica transendotelial máxima de aproximadamente 130 Ω·cm², e esta linha de análise apresenta uma fraca capacidade de distinguir entre marcadores de permeabilidade paracelular e transcelular.
• Foi demonstrado que as células bEnd.3 contribuem para a manutenção das células estaminais pluripotentes humanas na qualidade de células alimentadoras, alargando assim as suas aplicações na biologia das células estaminais.

O que é o bEnd.3?

O bEnd.3 foi obtido a partir de tecido cerebral de um rato BALB/c com 6 semanas de idade, de sexo não especificado (número de acesso Cellosaurus CVCL_0170). As células de endotelioma originais foram geradas através da transformação de células endoteliais murinas com o antígeno «middle T» (mT) do vírus do polioma. Um estudo marcante de 1990, realizado por Montesano, Pepper e colegas, demonstrou que as células de endotelioma que expressam mT apresentam uma atividade proteolítica significativamente aumentada — nomeadamente, níveis elevados do ativador do plasminogénio do tipo uroquinase, juntamente com uma produção reduzida do inibidor do ativador do plasminogénio — e formam grandes estruturas císticas semelhantes a hemangiomas dentro de géis de fibrina, o que explica a profunda subversão do desenvolvimento vascular normal por parte do oncogene [1]. Esta base mecanicista ajudou a definir o fenótipo transformado que está na origem do comportamento biológico e da utilidade do bEnd.3 em contextos experimentais.

Trabalhos de caracterização posteriores definiram em pormenor o perfil morfológico e molecular da linha celular. Omidi e colegas relataram que as células bEnd.3 apresentam uma morfologia escamosa característica, semelhante a um fuso, em cultura e expressam proteínas associadas a vesículas, incluindo clatrina, caveolina-1, flotilina e dinamina II, o que é consistente com um mecanismo ativo de tráfego vesicular [2]. O mesmo estudo confirmou a presença de transcritos dos elementos das junções apertadas ZO-1, JAM, ocludina, claudina-1 e claudina-5, bem como a captação funcional de glicose mediada por GLUT-1 e o efluxo mediado pela P-glicoproteína. Em cocultura com astrócitos C6, as monocamadas atingiram uma resistência elétrica transendotelial máxima de aproximadamente 130 Ω·cm², embora os autores também tenham constatado que as células não discriminavam de forma significativa entre sondas de permeabilidade paracelular e transcelular. Yuen e colegas relataram posteriormente que as células bEnd.3 também expressam os marcadores endoteliais linfáticos LYVE-1 e VEGFR-3, bem como os marcadores de progenitores Sca-1 e CD133, e formam tubos do tipo capilar após estimulação com TNF-alfa — uma descoberta que alargou a importância biológica da linha celular para além da investigação clássica sobre o sistema vascular sanguíneo [3].

Vantagens do bEnd.3

Uma das vantagens mais significativas do bEnd.3 é a sua acessibilidade e reprodutibilidade prática. Ao contrário das células endoteliais microvasculares cerebrais primárias, que exigem procedimentos de isolamento laboriosos e apresentam uma capacidade limitada de passagem, o bEnd.3 é uma linha imortalizada que pode ser expandida de forma fiável em diferentes laboratórios. Com um tempo de duplicação de 26 a 30 horas, as células são adequadas para experiências que exigem grandes quantidades de células uniformes. A sua expressão estável de marcadores endoteliais — incluindo as proteínas das junções apertadas claudina-5, ocludina e ZO-1, bem como eNOS e PECAM-1 — torna-as um substituto prático do endotélio microvascular cerebral numa ampla gama de condições experimentais, desde que sejam tidas em conta as ressalvas relativas à função de barreira descritas abaixo.

A versatilidade das células bEnd.3 abrange várias disciplinas de investigação. Estudos têm utilizado esta linha para modelar a ruptura da barreira hematoencefálica (BHE) durante o AVC isquémico e a lesão por reperfusão, investigar a neuroinflamação desencadeada por moléculas de adesão, caracterizar a expressão de genes angiogénicos e explorar a comunicação intercelular mediada por conexinas. Além disso, Joubin e colegas demonstraram que as células bEnd.3 conseguem manter células estaminais pluripotentes humanas num estado indiferenciado, funcionando como células alimentadoras que podem ser geneticamente modificadas — uma capacidade que não é facilmente replicada com culturas primárias de curta duração [4]. Esta amplitude de aplicações demonstra a utilidade da linha celular nas áreas da neurociência, da biologia vascular, da farmacologia e da investigação com células estaminais.

Limitações do bEnd.3

Apesar da sua utilização generalizada, o bEnd.3 apresenta limitações importantes quando utilizado como modelo da barreira hematoencefálica (BHE). Omidi e colegas mediram uma resistência elétrica transendotelial máxima de apenas cerca de 130 Ω·cm², e esse valor exigiu a cocultura com astrócitos C6; mais importante ainda, as monocamadas demonstraram pouca distinção entre sondas transcelulares e paracelulares, com coeficientes de permeabilidade para o propranolol e a sacarose a diferirem apenas marginalmente [2]. Os autores concluíram que esta linha celular não é adequada para avaliações da permeabilidade transendotelial, embora continue a ser valiosa para estudos sobre os mecanismos de transporte da barreira hematoencefálica. Os dados de permeabilidade obtidos neste sistema devem, por conseguinte, ser interpretados com cautela e, sempre que possível, complementados com sistemas de cocultura ou validação in vivo.

A própria organização das junções apertadas constitui uma fraqueza associada. Song e Pachter compararam o bEnd.3 com células endoteliais microvasculares cerebrais primárias de ratinho recém-purificadas e descobriram que, enquanto as células primárias concentravam claudina-5, oclusina e ZO-1 ao longo das fronteiras intercelulares e separavam a oclusina e a ZO-1 da estrutura do citoesqueleto resistente a detergentes, as células bEnd.3 apresentavam uma localização citoplasmática difusa da ocludina e da ZO-1 e retinham estas proteínas predominantemente na fração solúvel [5]. A expressão de uma proteína das junções apertadas em bEnd.3 não implica, por si só, a montagem correta das junções.

A natureza transformada do bEnd.3, resultante da expressão do oncogene mT, pode também introduzir artefactos fenotípicos que não estão presentes no endotélio cerebral normal. Atividade proteolítica elevada — uma característica distintiva das células de endotelioma que expressam o mT [1] — e a expressão de marcadores linfáticos, como o LYVE-1 e o VEGFR-3, sugere que a linha celular não reproduz totalmente o endotélio vascular sanguíneo normal [3]. Além disso, o sexo do dador não é especificado para esta linha celular, o que limita a aplicabilidade dos resultados a questões de investigação estratificadas por sexo. Estas considerações não diminuem o valor da linha celular, mas sublinham a importância de compreender o seu contexto biológico específico.

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Aplicações

Modelação da barreira hematoencefálica e acidente vascular cerebral isquémico

A aplicação mais notável do bEnd.3 é como modelo in vitro da barreira hematoencefálica em condições isquémicas e pós-isquémicas. Koto e colegas demonstraram que a hipoxia (1% de O₂) alterava a localização e o nível proteico da claudina-5 em monocamadas de bEnd.3, causando uma diminuição mensurável da resistência elétrica transendotelial, e confirmaram a correspondente perda de claudina-5 no endotélio microvascular da retina in vivo [6]. Isto estabeleceu uma ligação mecânica entre a remodelação das junções apertadas e a ruptura da barreira durante a hipoxia neural, e posicionou a bEnd.3 como um sistema maleável para o estudo dos eventos moleculares subjacentes à falha da BHE no AVC.

Um estudo frequentemente citado por Kim e colegas utilizou a linha celular como um modelo in vitro da BHE exposto à privação de oxigénio e glicose (OGD) para simular a isquemia. Dezoito horas de OGD induziram disfunção celular, aumento da permeabilidade, degradação da ocludina e ativação de vias de autofagia, com a ocludina degradada a co-localizar-se com autofagossomas isquémicos; tanto a perda de ocludina como a alteração da permeabilidade foram significativamente reduzidas pelo inibidor da autofagia 3-metiladenina. As mesmas alterações moleculares e a sua reversão pela 3-metiladenina foram posteriormente reproduzidas nos capilares cerebrais de ratos submetidos a oclusão da artéria cerebral média [7]. Este trabalho estabeleceu um quadro mecanístico que associa o fluxo autofágico à perda de proteínas das junções estreitas e proporcionou importantes insights translacionais sobre a patologia do AVC.

Investigação complementar demonstrou que a agmatina atenua a expressão das metaloproteinases da matriz 2 e 9 nas células endoteliais cerebrais — incluindo as bEnd.3 — submetidas a lesão por privação de oxigénio e glicose (OGD) seguida de reperfusão, com a regulação negativa da MMP-9 a ocorrer em paralelo com a regulação positiva da eNOS e a manutenção da libertação de óxido nítrico, oferecendo um potencial mecanismo neuroprotetor relevante para lesões cerebrais e lesões por reperfusão [8]. Estudos sobre a apoptose mediada pela Ang II mostraram ainda que o hiperosídeo protege as células bEnd.3 e preserva a integridade de uma monocamada in vitro da BHE, atuando sobre a JAM-A, a claudina-5, a ZO-1, a caveolina-1 e a Mfsd2a, sugerindo vias terapêuticas para a proteção cerebrovascular [9]. A investigação sobre a sobreexpressão de circLphn3 em células bEnd.3 também destacou o papel do ARN não codificante na manutenção da expressão de proteínas das junções apertadas — incluindo ZO-1, ZO-2 e ocludina — na sequência de traumatismo cranioencefálico, com o circLphn3 a atuar como uma esponja molecular para o miR-185-5p [10].

Neuroinflamação, Toxicologia Endotelial e Doença de Alzheimer

As células bEnd.3 têm sido amplamente utilizadas para estudar a sinalização inflamatória no endotélio cerebrovascular. Jeong e colegas demonstraram que o cádmio — um metal pesado onipresente que se acumula fora da barreira hematoencefálica — estimulava a expressão de ICAM-1 nas células bEnd.3 através da ativação do NF-κB induzida pela fosforilação da tirosina de IκBα, em vez da sua degradação, fornecendo uma base mecânica para a toxicidade cerebrovascular induzida pelo cádmio [11]. De forma semelhante, Zhang e colegas relataram que a proteína C-reativa, em concentrações de 1–75 mg/L, aumentava a expressão de ICAM-1 e VCAM-1 e a fuga de LDH nas células bEnd.3, sugerindo um papel direto desta proteína de fase aguda na lesão da BHE durante o AVC isquémico [12].

A toxicidade endotelial induzida por pesticidas também foi investigada nesta linha celular. Jung e colegas demonstraram que o N-nitrosocarbofurano, o metabolito nitroso do pesticida carbamato carbofurano, induzia a apoptose nas células bEnd.3 através das vias da MAP quinase, com a via ERK a desempenhar um papel predominante na morte celular [13]. A citotoxicidade induzida pela lisofosfatidilcolina em células bEnd.3 foi analisada por Tsai e colegas, que atribuíram a morte celular à sobrecarga de cálcio no citosol, à perda do potencial de membrana mitocondrial, ativação da p38 e ativação da caspase-3 — notavelmente sem geração de espécies reativas de oxigénio — e identificaram a heparina como um agente protetor que atua a jusante da p38 [14]. Trabalhos mais recentes sobre o tratamento com florfenicol documentaram que a remodelação da F-actina mediada pela ROCK/cofilina contribui para a redução da proliferação e da migração nas células endoteliais bEnd.3 [15].

No âmbito da investigação sobre a doença de Alzheimer, as células bEnd.3 têm servido de modelo para a perturbação da BHE mediada pelo péptido beta-amilóide. Chan e colegas demonstraram que as alterações da autofagia induzidas por oligómeros de Aβ nas células bEnd.3 foram bloqueadas pelo RNA pequeno interferente RAGE, associando a sinalização do RAGE através do eixo CaMKKβ/AMPK/mTOR à lesão dependente da autofagia das proteínas da estrutura das junções apertadas ZO-1, ocludina e claudina-5 [16]. Por outro lado, demonstrou-se que o polifenol da semente de lichia protege a integridade da BHE ao inibir a ativação do inflamassoma NLRP3 induzida por Aβ(25–35) através da via de autofagia mediada por AMPK/mTOR/ULK1 em células bEnd.3, tendo os resultados sido corroborados em ratos transgénicos APP/PS1 — um estudo que aprofundou a compreensão da interação entre a autofagia e o inflamassoma na interface neurovascular [17]. A fotobiomodulação foi analisada no mesmo contexto: Ma e colegas utilizaram células bEnd.3 estimuladas com LPS, juntamente com ratos APP/PS1, para demonstrar que o tratamento com infravermelho próximo melhora o metabolismo energético mitocondrial, regula positivamente a ocludina, a claudina-5 e a ZO-1 e protege a integridade da barreira de forma dependente da AMPK [18].

Angiogénese e sinalização vascular

As células bEnd.3 revelaram-se altamente informativas em estudos sobre a sinalização angiogénica. Yue e colegas utilizaram um microarray de cDNA para traçar o perfil da expressão génica angiogénica em células bEnd.3 tratadas com fator de crescimento fibroblástico básico (bFGF), identificando a regulação positiva de genes pró-angiogénicos, incluindo ADAMTS1, MMP-9, angiopoietina-1, PDGF-B e G-CSF, a regulação negativa de genes antiangiogénicos, tais como o TIMP-2 e o TSP-3, e a indução da ciclooxigenase-2 (COX-2) tanto ao nível do ARNm como ao nível proteico [19]. Esta abordagem de alto rendimento estabeleceu as células bEnd.3 como uma plataforma conveniente para a caracterização da angiogénese à escala do genoma.

As respostas angiogénicas induzidas pela hipoxia também foram mapeadas utilizando células bEnd.3. Zhu e colegas demonstraram que a hipóxia aumentava a expressão do ARNm e da proteína da endoglina (CD105) nas células bEnd.3 através da ativação da p38 MAPK, sendo que os inibidores desta via — e a MKK3 dominante negativa — suprimiam a indução da endoglina [20]. Uma vez que a endoglinha apresenta mutações na telangiectasia hemorrágica hereditária e é regulada positivamente durante a angiogénese ativa, estas descobertas associaram a sinalização da MAPK sensível à hipoxia à remodelação vascular patológica. Li e colegas demonstraram ainda que a hipoxia regula positivamente a atividade da CD73 (ecto-5'-nucleotidase), o ARNm e a proteína em células bEnd.3 de forma dependente do tempo, enquanto a reoxigenação inicialmente reverteu esta indução antes de a CD73 voltar a aumentar com a reoxigenação prolongada — o que implica a geração de adenosina como um mecanismo neuroprotetor durante a isquemia-reperfusão [21].

A sinalização da angiopoietina tem sido estudada em profundidade utilizando as células bEnd.3 como sistema modelo. Shi e colegas estabeleceram um modelo de apoptose sem soro em células bEnd.3 e demonstraram que a angiopoietina-1 inibe a apoptose das células endoteliais microvasculares através de um mecanismo que envolve a diminuição de Bax, o aumento de Bcl-2 e a redução da libertação de citocromo C das mitocôndrias para o citoplasma [22]. Perry e colegas alargaram a biologia da angiopoietina à investigação sobre hemangiomas, demonstrando a ativação constitutiva do recetor Tie-2 em hemangiomas humanos da infância e utilizando células bEnd.3 como um sistema modelo murino de hemangioma, no qual a inibição farmacológica da produção de angiopoietina-2 praticamente aboliu o crescimento tumoral in vivo [23].

eNOS, conexinas e função endotelial

A biologia da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) foi caracterizada nas células bEnd.3 com considerável precisão. Govers e colegas utilizaram microscopia de imunofluorescência para demonstrar que a localização da eNOS na membrana plasmática depende criticamente do contacto célula-célula, com um forte enriquecimento nos locais de contacto intercelular, assemelhando-se ao padrão de distribuição da PECAM-1, em vez do da VE-caderina ou da plakoglobina, e com a atividade da eNOS mais elevada em monocamadas confluentes do que em subconfluentes, apesar de a expressão se manter inalterada [24]. Este acoplamento espacial entre a localização e a atividade da eNOS destacou as células bEnd.3 como um modelo onde o contexto fisiológico do endotélio confluente pode ser investigado de forma significativa.

Bevers e colegas investigaram o desacoplamento da eNOS em células bEnd.3, que expressam eNOS a níveis mais de duas ordens de magnitude superiores aos de uma linha endotelial de comparação, ao mesmo tempo que não possuem iNOS nem nNOS. Verificaram que a suplementação com tetrahidrobiopterina (BH4) aumentava a produção de NO e diminuía a geração de espécies reativas de oxigénio, enquanto que a adição de L-arginina adicional aumentava ainda mais as ROS induzidas pelo VEGF — indicando que a deficiência relativa de BH4, e não a disponibilidade de arginina, impulsiona o desacoplamento neste contexto [25]. Este resultado tem relevância direta para as complicações vasculares de condições como a hipertensão e a aterosclerose, nas quais a sobreexpressão sustentada de eNOS pode, paradoxalmente, promover o stress oxidativo.

A comunicação através de junções comunicantes mediada por conexinas também foi analisada em células bEnd.3. Kwak e colegas compararam a expressão de conexinas e o acoplamento célula a célula antes e após lesões mecânicas em monocamadas de bEnd.3, observando uma regulação positiva da Cx43 e uma regulação negativa da Cx37 induzidas pela lesão no local da lesão, sem que a Cx40 fosse afetada [26]. A transfecção estável com inibidores de conexina dominantes negativos prolongou o tempo necessário para o fecho completo da lesão em cerca de 50%, sem alterar a proliferação, a migração de células individuais ou a atividade proteolítica, estabelecendo um papel específico para a comunicação através das junções comunicantes na reparação coordenada de lesões endoteliais.

Secreção de fatores neurotróficos e aplicações com células estaminais

As células bEnd.3 secretam fatores neurotróficos que atuam no microambiente neural circundante. Wang e colegas demonstraram que o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) é expresso e libertado pelas células bEnd.3, sendo que tanto a hipoxia sustentada como a intermitente estimulam a secreção de BDNF — sendo a hipoxia intermitente o estímulo mais potente [27]. A libertação de BDNF induzida pela hipoxia foi parcialmente inibida pela N-acetil-L-cisteína e por um mimético da superóxido dismutase, o que sugere o envolvimento das espécies reativas de oxigénio na sinalização neurotrófica induzida pela hipoxia e exigiu a mobilização de cálcio a partir das reservas internas. Estas descobertas estabeleceram o endotélio microvascular cerebral como um participante ativo na sobrevivência neural, e não meramente como uma barreira passiva.

Mais notável ainda, Joubin e colegas demonstraram que as células bEnd.3 mantêm as células estaminais pluripotentes humanas num estado indiferenciado, secretando uma atividade solúvel que imita o nicho proporcionado pelos fibroblastos embrionários de ratinho [4]. Os autores demonstraram ainda que as células bEnd.3 podem ser geneticamente modificadas para expressar marcadores fluorescentes ou genes de resistência a fármacos, criando camadas alimentadoras personalizadas para a cultura de células estaminais — uma aplicação que expande significativamente a utilidade da linha celular para além da investigação endotelial clássica.

Conclusão

A bEnd.3 continua a ser uma das linhas celulares mais versáteis e produtivas na investigação neurovascular e da barreira hematoencefálica (BHE). Desde a modelação do AVC isquémico e da lesão de reperfusão até à análise da sinalização da eNOS, da reparação de feridas mediada por conexinas, da expressão de genes angiogénicos e da perturbação das junções apertadas induzida pela autofagia, esta linha celular endotelial microvascular do cérebro de ratinho tem contribuído com novos conhecimentos em várias disciplinas biomédicas. A sua aplicabilidade a questões relacionadas com a doença de Alzheimer, lesões cerebrais traumáticas e triagem de agentes neuroprotetores consolida ainda mais o seu lugar no conjunto de ferramentas de investigação neurocientífica — desde que a sua permeabilidade limitada da barreira e o seu fenótipo transformado sejam tidos em conta na conceção experimental. Os investigadores que procurem um modelo endotelial in vitro e de transporte através da barreira hematoencefálica (BBB) bem caracterizado, reprodutível e experimentalmente maleável são encorajados a explorar as células Bend.3 disponíveis em cytion.com, onde são fornecidas as especificações completas do produto e informações sobre encomendas.

Publicações-chave

1. Montesano R, Pepper MS, Möhle-Steinlein U, et al. (1990) O aumento da atividade proteolítica é responsável pelo comportamento morfogenético anómalo das células endoteliais que expressam o oncogene T médio. Cell 62:435–445. PMID: 2379237
2. Omidi Y, Campbell L, Barar J, et al. (2003) Avaliação da linha celular imortalizada de células endoteliais capilares do cérebro de ratinho, b.End3, como modelo in vitro da barreira hematoencefálica para estudos de absorção e transporte de fármacos. Brain Research 990:95–112. PMID: 14568334
3. Yuen D, Leu R, Tse J, et al. (2014) Nova caracterização das células bEnd.3 que expressam o recetor-1 de hialuronano endotelial dos vasos linfáticos. Lymphology 47:73–81. PMID: 25282873
4. Joubin K, Richardson A, Novoa N, et al. (2012) A linha celular endotelial bEnd.3 mantém células estaminais pluripotentes humanas. Stem Cells and Development 21:2312–2321. PMID: 22224974
5. Song L, Pachter JS (2003) Cultura de células endoteliais microvasculares cerebrais murinas que mantêm a expressão e a associação citosquelética de proteínas associadas às junções estreitas. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal 39:313–320. PMID: 14613336
6. Koto T, Takubo K, Ishida S, et al. (2007) A hipoxia perturba a função de barreira dos vasos sanguíneos neurais através de alterações na expressão da claudina-5 nas células endoteliais. The American Journal of Pathology 170:1389–1397. PMID: 17392177
7. Kim KA, Kim D, Kim JH, et al. (2020) A degradação da ocludina mediada pela autofagia contribui para a ruptura da barreira hematoencefálica durante a isquemia em células endoteliais cerebrais bEnd.3 e em modelos de AVC isquémico em ratos. Fluids and Barriers of the CNS 17:21. PMID: 32169114
8. Yang MZ, Mun CH, Choi YJ, et al. (2007) A agmatina inibe a metaloproteinase-9 da matriz através da óxido nítrico sintase endotelial em células endoteliais cerebrais. Neurological Research 29:749–754. PMID: 17588309
9. Xie YY, Lu YW, Yu GR (2022) Os efeitos protetores do hiperosídeo na apoptose mediada pela Ang II em células bEnd.3 e na lesão do modelo da barreira hematoencefálica in vitro. BMC Complementary Medicine and Therapies 22:157. PMID: 35698113
10. Cheng YQ, Wu CR, Du MR, et al. (2022) O CircLphn3 protege a barreira hematoencefálica na lesão cerebral traumática. Neural Regeneration Research 17:812–818. PMID: 34472480
11. Jeong EM, Moon CH, Kim CS, et al. (2004) O cádmio estimula a expressão de ICAM-1 através da ativação de NF-kappaB em células endoteliais cerebrovasculares. Biochemical and Biophysical Research Communications 320:887–892. PMID: 15240131
12. Zhang J, Rui YC, Yang PY, et al. (2006) A proteína C-reativa induziu a expressão de moléculas de adesão em células endoteliais microvasculares cerebrais em cultura. Life Sciences 78:2983–2988. PMID: 16412476
13. Jung YS, Kim CS, Park HS, et al. (2003) O N-nitrosocarbofurano induz a apoptose em células endoteliais microvasculares cerebrais de ratinho (bEnd.3). Journal of Pharmacological Sciences 93:489–495. PMID: 14737022
14. Tsai TY, Leong IL, Cheng KS, et al. (2019) Citotoxicidade induzida pela lisofosfatidilcolina e proteção pela heparina em células endoteliais bEND.3 do cérebro de ratinho. Fundamental & Clinical Pharmacology 33:52–62. PMID: 29974515
15. Hu D, Shen Z, Hou X, et al. (2025) A remodelação da actina mediada pela ROCK contribui para a redução da proliferação e migração das células endoteliais bEnd.3 tratadas com florfenicol. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology 39:e70453. PMID: 40826991
16. Chan Y, Chen W, Chen Y, et al. (2020) A fórmula Yi-Zhi-Fang-Dai exerce um efeito protetor contra a lesão das proteínas da estrutura das junções apertadas in vitro e in vivo, mediando a autofagia através da regulação da via RAGE/CaMKKβ/AMPK/mTOR. Biological & Pharmaceutical Bulletin 43:1847–1858. PMID: 33268702
17. Xiong R, Zhou XG, Tang Y, et al. (2021) O polifenol da semente de lichia protege a barreira hematoencefálica ao inibir a ativação do inflamassoma NLRP3 induzida por Aβ(25-35) através da autofagia mediada por AMPK/mTOR/ULK1 em células bEnd.3 e ratos APP/PS1. Phytotherapy Research 35:954–973. PMID: 32893437
18. Ma C, Ye Y, Shi X, et al. (2025) A fotobiomodulação atenua a perturbação da barreira hematoencefálica no modelo murino APP/PS1 da doença de Alzheimer através da ativação da via da AMPK. Alzheimer’s Research & Therapy 17:141. PMID: 40551167
19. Yue F, Zhang GP, Jin HM (2006) Efeitos do fator de crescimento fibroblástico básico na expressão do perfil de genes angiogénicos e da ciclooxigenase-2 em células endoteliais microvasculares cerebrais. Sheng Li Xue Bao 58:124–128. PMID: 16628358
20. Zhu Y, Sun Y, Xie L, et al. (2003) Indução hipóxica da endoglin por meio de proteínas quinases ativadas por mitógenos em células endoteliais microvasculares cerebrais de ratos. Stroke 34:2483–2488. PMID: 12947156
21. Li X, Zhou T, Zhi X, et al. (2006) Efeito da hipoxia/reoxigenação na CD73 (ecto-5'-nucleotidase) em linhas celulares endoteliais de microvasos de ratos. Microvascular Research 72:48–53. PMID: 16828810
22. Shi LG, Zhang GP, Jin HM (2006) Inibição da apoptose das células endoteliais microvasculares pela angiopoietina-1 e o envolvimento do citocromo C. Chinese Medical Journal 119:725–730. PMID: 16701012
23. Perry BN, Govindarajan B, Bhandarkar SS, et al. (2006) O bloqueio farmacológico da angiopoietina-2 é eficaz contra hemangiomas em modelos em ratos. The Journal of Investigative Dermatology 126:2316–2322. PMID: 16741507
24. Govers R, Bevers L, de Bree P, et al. (2002) A atividade da óxido nítrico sintase endotelial está associada à sua presença nos contactos célula-célula. The Biochemical Journal 361:193–201. PMID: 11772391
25. Bevers LM, Braam B, Post JA, et al. (2006) A tetrahidrobiopterina, mas não a L-arginina, diminui o desacoplamento da sintase de NO em células que expressam níveis elevados de sintase de NO endotelial. Hypertension 47:87–94. PMID: 16344367
26. Kwak BR, Pepper MS, Gros DB, et al. (2001) Inibição da reparação de lesões endoteliais por inibidores de conexina dominantes negativos. Molecular Biology of the Cell 12:831–845. PMID: 11294890
27. Wang H, Ward N, Boswell M, et al. (2006) Secreção do fator neurotrófico derivado do cérebro por células endoteliais microvasculares cerebrais. The European Journal of Neuroscience 23:1665–1670. PMID: 16553631