Introduzione

Il Cellule Bend.3 La linea — nota anche con i sinonimi bEND.3, b.End3, bEnd3, BEND-3, BEND3 e “cellule endoteliali di origine cerebrale.3” — è una linea cellulare endoteliale microvascolare del cervello di topo trasformata, che è diventata uno degli strumenti in vitro più utilizzati nella biologia neurovascolare. La linea è stata ottenuta da tessuto di endotelioma cerebrale murino in seguito alla trasformazione con l’antigene T medio del virus del polioma, una manipolazione che conferisce una capacità proliferativa stabile e indefinita, preservando al contempo le caratteristiche endoteliali fondamentali. Sin dalla sua caratterizzazione nei primi anni ’90, bEnd.3 è servita come surrogato accessibile e riproducibile per lo studio della barriera emato-encefalica (BBB), dell’ischemia cerebrale, dell’ictus, del danno da riperfusione, dell’angiogenesi e, più in generale, della biologia delle cellule endoteliali. La sua utilità nella modellizzazione della rottura della BBB nel contesto dell’ictus ischemico, del morbo di Alzheimer e del trauma cranico ne ha fatto uno strumento ampiamente adottato sia nella ricerca neuroscientifica di base che in quella traslazionale.

Punti chiave

• bEnd.3 è una linea cellulare endoteliale microvascolare cerebrale di topo trasformata, derivata da tessuto cerebrale di topo BALB/c e trasformata con l'antigene T medio del virus del polioma (codice di accesso Cellosaurus CVCL_0170).
• È ampiamente utilizzato come modello in vitro della barriera emato-encefalica per lo studio dell'ictus ischemico, del danno da riperfusione, del morbo di Alzheimer e della neuroinfiammazione.
• Le cellule esprimono marcatori chiave associati alla barriera emato-encefalica (BBB), tra cui le proteine delle giunzioni strette claudina-5, occludina e ZO-1, nonché eNOS e PECAM-1.
• Le cellule bEnd.3 esprimono marcatori endoteliali linfatici quali LYVE-1 e VEGFR-3, ampliando così la loro rilevanza nella ricerca sulla biologia vascolare.
• La linea cellulare ha un tempo di raddoppio compreso tra 26 e 30 ore, il che la rende adatta a lavori sperimentali su larga scala.
• La tenuta della barriera è limitata: una resistenza elettrica transendoteliale massima di circa 130 Ω·cm² è stata raggiunta solo nella cocultura astrogliale, e la linea di demarcazione non distingue chiaramente tra i marcatori di permeabilità paracellulare e transcellulare.
• È stato dimostrato che le cellule bEnd.3 favoriscono il mantenimento delle cellule staminali pluripotenti umane in qualità di cellule di supporto, ampliando così il loro campo di applicazione nella biologia delle cellule staminali.

Che cos’è bEnd.3?

bEnd.3 è stato isolato dal tessuto cerebrale di un topo BALB/c di 6 settimane di età, di sesso non specificato (codice di accesso Cellosaurus CVCL_0170). Le cellule endoteliomate originarie sono state generate trasformando cellule endoteliali murine con l’antigene middle T (mT) del virus del polioma. Uno studio fondamentale del 1990 condotto da Montesano, Pepper e colleghi ha dimostrato che le cellule di endotelioma che esprimono mT presentano un’attività proteolitica notevolmente aumentata — in particolare livelli elevati di attivatore del plasminogeno di tipo urochinasi insieme a una ridotta produzione di inibitore dell’attivatore del plasminogeno — e formano grandi strutture cistiche simili a emangiomi all’interno di gel di fibrina, il che spiega la profonda alterazione dello sviluppo vascolare normale causata dall’oncogene [1]. Queste basi meccanicistiche hanno contribuito a definire il fenotipo trasformato che sta alla base del comportamento biologico di bEnd.3 e della sua utilità in contesti sperimentali.

Successivi studi di caratterizzazione hanno definito in dettaglio il profilo morfologico e molecolare della linea cellulare. Omidi e colleghi hanno riferito che le cellule bEnd.3 presentano in coltura una morfologia squamosa distintiva simile a un fuso ed esprimono proteine associate alle vescicole, tra cui clatrina, caveolina-1, flotillina e dinamina II, in linea con un meccanismo attivo di traffico vescicolare [2]. Lo stesso studio ha confermato la presenza di trascritti relativi agli elementi delle giunzioni strette ZO-1, JAM, occludina, claudina-1 e claudina-5, nonché l’assorbimento funzionale del glucosio mediato da GLUT-1 e l’efflusso mediato dalla P-glicoproteina. In cocultura con astrociti C6, i monostrati hanno raggiunto una resistenza elettrica transendoteliale massima di circa 130 Ω·cm², sebbene gli autori abbiano anche riscontrato che le cellule non discriminavano in modo significativo tra sonde di permeabilità paracellulare e transcellulare. Yuen e colleghi hanno successivamente riportato che le cellule bEnd.3 esprimono anche i marcatori endoteliali linfatici LYVE-1 e VEGFR-3, nonché i marcatori dei progenitori Sca-1 e CD133, e formano tubi di tipo capillare in seguito alla stimolazione con il TNF-alfa — una scoperta che ha ampliato il significato biologico della linea cellulare oltre la classica ricerca sui vasi sanguigni [3].

Vantaggi di bEnd.3

Uno dei vantaggi più significativi di bEnd.3 è la sua accessibilità e la riproducibilità pratica. A differenza delle cellule endoteliali microvascolari cerebrali primarie, che richiedono procedure di isolamento laboriose e presentano una capacità di passaggi limitata, bEnd.3 è una linea immortalizzata che può essere espansa in modo affidabile in diversi laboratori. Con un tempo di raddoppio di 26–30 ore, queste cellule sono particolarmente adatte a esperimenti che richiedono grandi quantità di cellule uniformi. La loro espressione stabile dei marcatori endoteliali — tra cui le proteine delle giunzioni strette claudina-5, occludina e ZO-1, nonché eNOS e PECAM-1 — le rende un pratico sostituto dell’endotelio microvascolare cerebrale in un’ampia gamma di condizioni sperimentali, a condizione che si tenga conto delle avvertenze relative alla funzione di barriera descritte di seguito.

La versatilità di bEnd.3 si estende a molteplici discipline di ricerca. Alcuni studi hanno utilizzato questa linea per modellare la rottura della barriera emato-encefalica (BBB) durante l’ictus ischemico e il danno da riperfusione, per indagare la neuroinfiammazione innescata dalle molecole di adesione, per caratterizzare l’espressione genica angiogenica e per esplorare la comunicazione intercellulare mediata dalle connessine. Inoltre, Joubin e colleghi hanno dimostrato che le cellule bEnd.3 sono in grado di mantenere le cellule staminali pluripotenti umane in uno stato indifferenziato, fungendo da cellule nutrici che possono essere geneticamente modificate — una capacità difficilmente replicabile con colture primarie di breve durata. [4]. Questa ampia gamma di applicazioni dimostra l'utilità della linea cellulare nei campi delle neuroscienze, della biologia vascolare, della farmacologia e della ricerca sulle cellule staminali.

Limiti di bEnd.3

Nonostante il suo ampio utilizzo, bEnd.3 presenta importanti limiti quando viene impiegato come modello della barriera emato-encefalica (BBB). Omidi e colleghi hanno misurato una resistenza elettrica transendoteliale massima di soli 130 Ω·cm² circa, e tale valore richiedeva la cocultura con astrociti C6; ma, cosa ancora più critica, i monostrati mostravano scarsa capacità di distinguere tra sonde transcellulari e paracellulari, con coefficienti di permeabilità per il propranololo e il saccarosio che differivano solo marginalmente [2]. Gli autori hanno concluso che tale linea cellulare non è adatta alla valutazione della permeabilità transendoteliale, pur rimanendo utile per gli studi sui meccanismi di trasporto attraverso la barriera emato-encefalica. I dati sulla permeabilità ottenuti con questo sistema dovrebbero quindi essere interpretati con cautela e, ove possibile, integrati con sistemi di cocultura o con una validazione in vivo.

L’organizzazione delle giunzioni strette stesse rappresenta un punto debole correlato. Song e Pachter hanno confrontato bEnd.3 con cellule endoteliali microvascolari cerebrali murine primarie appena purificate e hanno scoperto che, mentre le cellule primarie concentravano claudina-5, occludina e ZO-1 lungo i confini intercellulari e separavano occludina e ZO-1 dalla struttura citoscheletrica resistente ai detergenti, le cellule bEnd.3 mostravano una localizzazione citoplasmatica diffusa di occludina e ZO-1 e trattenevano queste proteine prevalentemente nella frazione solubile [5]. L'espressione di una proteina delle giunzioni strette in bEnd.3 non implica quindi, di per sé, un corretto assemblaggio delle giunzioni.

La natura trasformata di bEnd.3, derivante dall’espressione dell’oncogene mT, potrebbe inoltre introdurre artefatti fenotipici non presenti nell’endotelio cerebrale normale. Elevata attività proteolitica — una caratteristica distintiva delle cellule di endotelioma che esprimono mT [1] — e l’espressione di marcatori linfatici quali LYVE-1 e VEGFR-3 suggerisce che la linea cellulare non riproduca appieno le caratteristiche dell’endotelio vascolare ematico normale [3]. Inoltre, il sesso del donatore non è specificato per questa linea cellulare, il che limita l’applicabilità dei risultati a questioni di ricerca stratificate per sesso. Queste considerazioni non sminuiscono il valore della linea cellulare, ma sottolineano l’importanza di comprenderne il contesto biologico specifico.

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Applicazioni

Modellizzazione della barriera emato-encefalica e ictus ischemico

L’applicazione più rilevante di bEnd.3 è quella di modello in vitro della barriera emato-encefalica in condizioni ischemiche e post-ischemiche. Koto e colleghi hanno dimostrato che l’ipossia (1% di O₂) alterava la localizzazione e il livello proteico della claudina-5 nei monostrati di bEnd.3, causando una diminuzione misurabile della resistenza elettrica transendoteliale, e hanno confermato la corrispondente perdita di claudina-5 nell’endotelio microvascolare retinico in vivo [6]. Ciò ha stabilito un nesso meccanicistico tra il rimodellamento delle giunzioni strette e la rottura della barriera durante l’ipossia neurale, e ha posizionato bEnd.3 come un sistema gestibile per lo studio degli eventi molecolari alla base del cedimento della BBB nell’ictus.

Uno studio spesso citato di Kim e colleghi ha utilizzato la linea cellulare come modello in vitro della barriera emato-encefalica (BBB) esposta a deprivazione di ossigeno e glucosio (OGD) per simulare l’ischemia. Diciotto ore di OGD hanno indotto disfunzione cellulare, aumento della permeabilità, degradazione dell’occludina e attivazione delle vie dell’autofagia, con l’occludina degradata che si localizzava insieme agli autofagosomi ischemici; sia la perdita di occludina che la variazione della permeabilità sono state marcatamente ridotte dall’inibitore dell’autofagia 3-metiladenina. Gli stessi cambiamenti molecolari e la loro inversione indotta dalla 3-metiladenina sono stati successivamente riprodotti nei capillari cerebrali di ratti sottoposti a occlusione dell’arteria cerebrale media [7]. Questo lavoro ha stabilito un quadro meccanicistico che collega il flusso autofagico alla perdita delle proteine delle giunzioni strette e ha fornito importanti spunti traslazionali sulla patologia dell’ictus.

Ricerche complementari hanno dimostrato che l’agmatina attenua l’espressione delle metalloproteinasi della matrice 2 e 9 nelle cellule endoteliali cerebrali — tra cui bEnd.3 — sottoposte a danno da OGD-riperfusione; la sottoregolazione della MMP-9 è avvenuta parallelamente alla sovraregolazione dell’eNOS e al mantenimento del rilascio di ossido nitrico, offrendo un potenziale meccanismo neuroprotettivo rilevante per le lesioni cerebrali e il danno da riperfusione [8]. Studi sull’apoptosi mediata dall’Ang II hanno inoltre dimostrato che l’iperoside protegge le cellule bEnd.3 e preserva l’integrità di un monostrato in vitro della barriera emato-encefalica (BBB), agendo su JAM-A, claudina-5, ZO-1, caveolina-1 e Mfsd2a e suggerendo vie terapeutiche per la protezione cerebrovascolare [9]. La ricerca sulla sovraespressione di circLphn3 nelle cellule bEnd.3 ha inoltre evidenziato il ruolo dell’RNA non codificante nel mantenimento dell’espressione delle proteine delle giunzioni strette — tra cui ZO-1, ZO-2 e l’occludina — a seguito di un trauma cranico, con circLphn3 che agisce come una spugna molecolare per miR-185-5p [10].

Neuroinfiammazione, tossicologia endoteliale e morbo di Alzheimer

Le cellule bEnd.3 sono state ampiamente utilizzate per studiare la segnalazione infiammatoria a livello dell’endotelio cerebrovascolare. Jeong e colleghi hanno dimostrato che il cadmio — un metallo pesante onnipresente che si accumula al di fuori della barriera emato-encefalica — stimola l’espressione di ICAM-1 nelle cellule bEnd.3 attraverso l’attivazione di NF-κB indotta dalla fosforilazione della tirosina di IκBα piuttosto che dalla sua degradazione, fornendo una base meccanicistica per la tossicità cerebrovascolare indotta dal cadmio [11]. Analogamente, Zhang e colleghi hanno riportato che la proteina C-reattiva a concentrazioni comprese tra 1 e 75 mg/L aumentava l’espressione di ICAM-1 e VCAM-1 e la perdita di LDH nelle cellule bEnd.3, suggerendo un ruolo diretto di questa proteina della fase acuta nel danno alla barriera emato-encefalica durante l’ictus ischemico [12].

In questa linea cellulare è stata studiata anche la tossicità endoteliale indotta dai pesticidi. Jung e colleghi hanno dimostrato che l’N-nitrosocarbofurano, il metabolita nitroso del pesticida carbammato carbofurano, induceva l’apoptosi nelle cellule bEnd.3 attraverso le vie delle MAP chinasi, con la via ERK che svolgeva un ruolo predominante nella morte cellulare [13]. La citotossicità indotta dalla lisofosfatidilcolina nelle cellule bEnd.3 è stata esaminata da Tsai e colleghi, i quali hanno ricondotto la morte cellulare a un sovraccarico di calcio citosolico, alla perdita del potenziale di membrana mitocondriale, all’attivazione della p38 e all’attivazione della caspasi-3 — in particolare senza generazione di specie reattive dell’ossigeno — e hanno identificato l’eparina come agente protettivo che agisce a valle della p38 [14]. Studi più recenti sul trattamento con florfenicolo hanno documentato che il rimodellamento dell’actina F mediato da ROCK/cofilina contribuisce alla riduzione della proliferazione e della migrazione nelle cellule endoteliali bEnd.3 [15].

Nel campo della ricerca sul morbo di Alzheimer, le cellule bEnd.3 sono state utilizzate come modello per la compromissione della barriera emato-encefalica (BBB) mediata dal peptide beta-amiloide. Chan e colleghi hanno dimostrato che le alterazioni dell’autofagia indotte dagli oligomeri di Aβ nelle cellule bEnd.3 venivano bloccate dal piccolo RNA interferente (siRNA) contro RAGE, collegando la segnalazione del RAGE attraverso l’asse CaMKKβ/AMPK/mTOR al danno, dipendente dall’autofagia, delle proteine dello scaffold delle giunzioni strette ZO-1, occludina e claudina-5 [16]. In un altro studio, è stato dimostrato che i polifenoli dei semi di litchi proteggono l’integrità della BBB inibendo l’attivazione dell’inflammasoma NLRP3 indotta dall’Aβ(25–35) attraverso la via dell’autofagia mediata da AMPK/mTOR/ULK1 nelle cellule bEnd.3; tali risultati sono stati confermati nei topi transgenici APP/PS1 — uno studio che ha approfondito la comprensione dell’interazione tra autofagia e inflammasoma all’interfaccia neurovascolare [17]. La fotobiomodulazione è stata esaminata nello stesso contesto: Ma e colleghi hanno utilizzato cellule bEnd.3 stimolate con LPS insieme a topi APP/PS1 per dimostrare che il trattamento con luce nel vicino infrarosso migliora il metabolismo energetico mitocondriale, upregola l’occludina, la claudina-5 e la ZO-1 e protegge l’integrità della barriera in modo AMPK-dipendente [18].

Angiogenesi e segnalazione vascolare

Le cellule bEnd.3 si sono rivelate estremamente utili negli studi sulla segnalazione angiogenica. Yue e colleghi hanno impiegato microarray di cDNA per profilare l’espressione genica angiogenica nelle cellule bEnd.3 trattate con fattore di crescita fibroblastico basico (bFGF), identificando la sovraregolazione di geni pro-angiogenici quali ADAMTS1, MMP-9, angiopoietina-1, PDGF-B e G-CSF, la sottoregolazione di geni anti-angiogenici quali TIMP-2 e TSP-3 e l’induzione della cicloossigenasi-2 (COX-2) sia a livello di mRNA che proteico [19]. Questo approccio ad alta produttività ha consolidato bEnd.3 come una piattaforma ideale per la caratterizzazione dell’angiogenesi su scala genomica.

Le risposte angiogeniche indotte dall’ipossia sono state mappate anche utilizzando le cellule bEnd.3. Zhu e colleghi hanno dimostrato che l’ipossia aumenta l’espressione dell’mRNA e della proteina dell’endoglina (CD105) nelle cellule bEnd.3 attraverso l’attivazione della p38 MAPK, mentre gli inibitori di questa via — e la MKK3 dominante negativa — sopprimono l’induzione dell’endoglina [20]. Poiché l’endoglin è mutata nella telangiectasia emorragica ereditaria ed è sovraregolata durante l’angiogenesi attiva, questi risultati hanno collegato la segnalazione della MAPK sensibile all’ipossia al rimodellamento vascolare patologico. Li e colleghi hanno inoltre dimostrato che l’ipossia sovraregola l’attività della CD73 (ecto-5'-nucleotidasi), l’mRNA e la proteina nelle cellule bEnd.3 in modo dipendente dal tempo, mentre la riossigenazione inizialmente invertiva questa induzione prima che la CD73 aumentasse nuovamente con una riossigenazione prolungata — implicando la generazione di adenosina come meccanismo neuroprotettivo durante l’ischemia-riperfusione [21].

La segnalazione dell’angiopoietina è stata studiata in modo approfondito utilizzando le cellule bEnd.3 come sistema modello. Shi e colleghi hanno stabilito un modello di apoptosi in assenza di siero nelle cellule bEnd.3 e hanno dimostrato che l’angiopoietina-1 inibisce l’apoptosi delle cellule endoteliali microvascolari attraverso un meccanismo che comporta una diminuzione di Bax, un aumento di Bcl-2 e una ridotta liberazione del citocromo C dai mitocondri nel citoplasma [22]. Perry e colleghi hanno esteso la biologia dell’angiopoietina alla ricerca sugli emangiomi, dimostrando l’attivazione costitutiva del recettore Tie-2 nell’emangioma umano dell’infanzia e utilizzando le cellule bEnd.3 come sistema murino modello di emangioma, in cui l’inibizione farmacologica della produzione di angiopoietina-2 ha quasi annullato la crescita tumorale in vivo [23].

eNOS, connessine e funzione endoteliale

La biologia della sintasi endoteliale dell’ossido nitrico (eNOS) è stata caratterizzata nelle cellule bEnd.3 con notevole precisione. Govers e colleghi hanno utilizzato la microscopia a immunofluorescenza per dimostrare che la localizzazione dell’eNOS sulla membrana plasmatica dipende in modo determinante dal contatto cellula-cellula, con un forte arricchimento nei siti di contatto intercellulare che ricorda il modello di distribuzione della PECAM-1 piuttosto che quello della VE-caderina o della plakoglobina, e con un’attività dell’eNOS più elevata nei monostrati confluenti rispetto a quelli subconfluenti, nonostante l’espressione rimanesse invariata [24]. Questo accoppiamento spaziale tra localizzazione e attività dell’eNOS ha messo in evidenza le cellule bEnd.3 come modello in cui è possibile studiare in modo significativo il contesto fisiologico dell’endotelio confluente.

Bevers e colleghi hanno studiato il disaccoppiamento dell’eNOS nelle cellule bEnd.3, che esprimono l’eNOS a livelli superiori di oltre due ordini di grandezza rispetto a quelli di una linea endoteliale di confronto, pur essendo prive di iNOS e nNOS. Hanno scoperto che l’integrazione di tetraidrobiopterina (BH4) aumentava la produzione di NO e riduceva la generazione di specie reattive dell’ossigeno (ROS), mentre l’aggiunta di L-arginina in eccesso aumentava ulteriormente i ROS indotti dal VEGF — indicando che in questo contesto è la relativa carenza di BH4, e non la disponibilità di arginina, a determinare il disaccoppiamento [25]. Questo risultato ha rilevanza diretta per le complicanze vascolari di condizioni quali l’ipertensione e l’aterosclerosi, in cui una sovraespressione prolungata di eNOS può paradossalmente favorire lo stress ossidativo.

La comunicazione tramite giunzioni comunicanti mediata dalla connessina è stata esaminata anche nelle cellule bEnd.3. Kwak e colleghi hanno confrontato l’espressione delle connessine e l’accoppiamento cellula-cellula prima e dopo la lesione meccanica dei monostrati di bEnd.3, osservando una sovraregolazione di Cx43 e una sottoregolazione di Cx37 indotte dalla lesione nel sito della lesione, mentre Cx40 non è stata influenzata [26]. La trasfezione stabile con inibitori della connessina dominanti negativi ha prolungato il tempo necessario per la completa chiusura della lesione di circa il 50% senza alterare la proliferazione, la migrazione delle singole cellule o l’attività proteolitica, stabilendo un ruolo specifico della comunicazione tramite giunzioni comunicanti nella riparazione coordinata delle lesioni endoteliali.

Secrezione di fattori neurotrofici e applicazioni con cellule staminali

Le cellule bEnd.3 secernono fattori neurotrofici che agiscono sul microambiente neurale circostante. Wang e colleghi hanno dimostrato che il fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF) viene espresso e rilasciato dalle cellule bEnd.3, con l’ipossia sia prolungata che intermittente che stimola la secrezione di BDNF — essendo l’ipossia intermittente lo stimolo più potente [27]. Il rilascio di BDNF indotto dall’ipossia è stato parzialmente inibito dall’N-acetil-L-cisteina e da un mimico della superossido dismutasi, il che implica il coinvolgimento delle specie reattive dell’ossigeno nella segnalazione neurotrofica guidata dall’ipossia e ha richiesto la mobilizzazione del calcio dalle riserve interne. Questi risultati hanno dimostrato che l’endotelio microvascolare cerebrale è un partecipante attivo alla sopravvivenza neurale, non semplicemente una barriera passiva.

Cosa ancora più sorprendente, Joubin e colleghi hanno dimostrato che le cellule bEnd.3 mantengono le cellule staminali pluripotenti umane in uno stato indifferenziato, secernendo un’attività solubile che imita la nicchia fornita dai fibroblasti embrionali di topo [4]. Gli autori hanno inoltre dimostrato che le cellule bEnd.3 possono essere geneticamente modificate per esprimere marcatori fluorescenti o geni di resistenza ai farmaci, creando strati di cellule di supporto su misura per la coltura di cellule staminali — un’applicazione che amplia significativamente l’utilità della linea cellulare oltre la classica ricerca endoteliale.

Conclusione

bEnd.3 rimane una delle linee cellulari più versatili e produttive nella ricerca neurovascolare e sulla barriera emato-encefalica (BBB). Dalla modellizzazione dell’ictus ischemico e del danno da riperfusione all’analisi della segnalazione dell’eNOS, della riparazione delle lesioni mediata dalle connessine, dell’espressione genica angiogenica e della rottura delle giunzioni strette indotta dall’autofagia, questa linea cellulare endoteliale microvascolare del cervello di topo ha fornito approfondimenti in molteplici discipline biomediche. La sua applicabilità a questioni relative al morbo di Alzheimer, ai traumi cranici e allo screening di agenti neuroprotettivi ne consolida ulteriormente il ruolo nel kit di strumenti della ricerca neuroscientifica — a condizione che la sua limitata tenuta di barriera e il fenotipo trasformato siano tenuti in considerazione nella progettazione sperimentale. I ricercatori alla ricerca di un modello endoteliale in vitro ben caratterizzato, riproducibile e sperimentalmente gestibile, che simuli il trasporto attraverso la barriera emato-encefalica (BBB), sono invitati a esplorare le cellule Bend.3 disponibili su cytion.com, dove sono fornite le specifiche complete del prodotto e le informazioni per l’ordinazione.

Pubblicazioni principali

1. Montesano R, Pepper MS, Möhle-Steinlein U, et al. (1990) L’aumento dell’attività proteolitica è responsabile del comportamento morfogenetico anomalo delle cellule endoteliali che esprimono l’oncogene T medio. Cell 62:435–445. PMID: 2379237
2. Omidi Y, Campbell L, Barar J, et al. (2003) Valutazione della linea cellulare endoteliale capillare cerebrale di topo immortalizzata, b.End3, come modello in vitro della barriera emato-encefalica per studi sull’assorbimento e il trasporto dei farmaci. Brain Research 990:95–112. PMID: 14568334
3. Yuen D, Leu R, Tse J, et al. (2014) Nuova caratterizzazione delle cellule bEnd.3 che esprimono il recettore 1 dell’ialuronano endoteliale dei vasi linfatici. Lymphology 47:73–81. PMID: 25282873
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6. Koto T, Takubo K, Ishida S, et al. (2007) L’ipossia compromette la funzione di barriera dei vasi sanguigni neurali attraverso alterazioni nell’espressione della claudina-5 nelle cellule endoteliali. The American Journal of Pathology 170:1389–1397. PMID: 17392177
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14. Tsai TY, Leong IL, Cheng KS, et al. (2019) Citotossicità indotta dalla lisofosfatidilcolina e protezione da parte dell’eparina nelle cellule endoteliali bEND.3 del cervello di topo. Fundamental & Clinical Pharmacology 33:52–62. PMID: 29974515
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16. Chan Y, Chen W, Chen Y, et al. (2020) La formula Yi-Zhi-Fang-Dai esercita un effetto protettivo sul danno alle proteine della struttura delle giunzioni strette in vitro e in vivo, mediando l’autofagia attraverso la regolazione della via RAGE/CaMKKβ/AMPK/mTOR. Biological & Pharmaceutical Bulletin 43:1847–1858. PMID: 33268702
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