İçeriğe atla
NE-4C
Doku
Beyin, Nöroektodermal

NE-4C

Cell line · Ürün numarası 305182

NE-4C cells are a murine neuroectodermal stem cell line derived from the cerebral vesicles of embryonic mouse brain tissue. The cell line is widely recogn...

€430.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
1

01Genel bilgiler

Açıklama

NE-4C hücreleri, embriyonik fare beyin dokusunun serebral veziküllerinden elde edilen bir fare nöroektodermal kök hücre hattıdır. Bu hücre hattı, tanımlanmış deney koşulları altında nöronal farklılaşmaya uğrama kabiliyetiyle yaygın olarak tanınmaktadır; bu özelliği, onu nörojenez, sinirsel gelişim ve nöronal soy belirlenmesi çalışmalarında değerli bir in vitro model haline getirmektedir. NE-4C hücreleri, nöral progenitör hücrelerin özelliklerini sergiler ve retinoik asit gibi ajanlarla tedavi edilerek nöron benzeri hücrelere farklılaşmaya yönlendirilebilir; bu da nöronal olgunlaşma ile ilişkili morfolojik ve moleküler değişikliklere yol açar.

Farklaşma sırasında NE-4C hücreleri, kullanılan farklılaşma protokolüne bağlı olarak uzamış nörit benzeri uzantılar geliştirir ve βIII-tubulin, MAP2 ve nörofilament proteinleri dahil olmak üzere nöronal belirteçleri eksprese eder. Nispeten homojen farklılaşma davranışları ve indüktif uyaranlara karşı tekrarlanabilir tepkileri nedeniyle, NE-4C hücreleri genellikle nöral spesifikasyon, sinaptik gelişim, nörotoksisite, oksidatif stres tepkileri ve nöroprotektif mekanizmalarda rol oynayan sinyal yolaklarını araştırmak için kullanılır. Bu model ayrıca nörodejeneratif hastalık mekanizmaları, gelişimsel nörobiyoloji ve nöronal farklılaşmayı veya hayatta kalmayı etkileyen bileşiklerin taranması ile ilgili çalışmalarda da uygulanmıştır.

Doku
Beyin, Nöroektodermal

02Sınıflandırma

Canlı
Fare
Büyüme özellikleri
Bağlı
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Nöroepitelyal

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
NE-4C (Cytion katalog numarası 305182)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
10090
Cellosaurus
CVCL_B063

05İfade ve duyarlılık

Antijen ekspresyonu
Sox-2, Otx-2, En-1

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion makale numarası 820100a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ve %1 NEAA ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Ekim yoğunluğu
1 ila 3 x 104 hücre/cm2
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Tür / alt tür
C57BL/6 x 129/Sv-Trp53-/-
Bağışçının yaşı
Embriyo