Mine otse sisu juurde
NE-4C
Kude
Aju, neuroektodermaalne

Dokumendid

NE-4C

Cell line · Toote number 305182

NE-4C cells are a murine neuroectodermal stem cell line derived from the cerebral vesicles of embryonic mouse brain tissue. The cell line is widely recogn...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

NE-4C-rakud on hiire neuroektodermaalne tüvirakuliin, mis on saadud hiire embrüonaalse ajukoe ajuvesiklitest. Seda rakuliini tunnustatakse laialdaselt selle võime poolest läbida neuronaalne diferentseerumine kindlaksmääratud katsetingimustes, mis teeb sellest väärtusliku in vitro mudeli neurogeneesi, närvisüsteemi arengu ja neuronaalse liini määratlemise uurimiseks. NE-4C-rakud ilmutavad närvi-eellaste omadusi ning neid on võimalik indutseerida diferentseeruma neuroni-sarnasteks rakkudeks, kasutades selleks näiteks retinoehapet, mille tulemusena tekivad neuroni küpsemisega seotud morfoloogilised ja molekulaarsed muutused.

Diferentseerumise käigus arendavad NE-4C-rakud välja pikad neuritiidilaadsed väljasopistused ja ekspresseerivad neuronaalseid markereid, sealhulgas βIII-tubuliini, MAP2-d ja neurofilamentvalke, sõltuvalt kasutatavast diferentseerumisprotokollist. Tänu suhteliselt ühtlasele diferentseerumiskäitumisele ja indutseerivatele stiimulitele antavale korratavale reaktsioonile kasutatakse NE-4C-rakke sageli närvirakkude spetsialiseerumises, sünaptilises arengus, neurotoksilisuses, oksüdatiivse stressi reaktsioonides ja neuroprotektiivsetes mehhanismides osalevate signaaliteede uurimiseks. Seda mudelit on kasutatud ka neurodegeneratiivsete haiguste mehhanismide, arenguneurobioloogia ning neuronaalset diferentseerumist või ellujäämist mõjutavate ühendite sõelumise uuringutes.

Kude
Aju, neuroektodermaalne

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Neuroepiteelne

04Tunnused

Viide
NE-4C (Cytioni katalooginumber 305182)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_B063

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Antigeeni ekspressioon
Sox-2, Otx-2, En-1

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 kuni 3 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
C57BL/6 x 129/Sv-Trp53-/-
Doonori vanus
Embrüo