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NE-4C
Tessuto
Cervello, neuroectodermico

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NE-4C

Cell line · Codice prodotto 305182

NE-4C cells are a murine neuroectodermal stem cell line derived from the cerebral vesicles of embryonic mouse brain tissue. The cell line is widely recogn...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule NE-4C sono una linea cellulare staminale neuroectodermica murina derivata dalle vescicole cerebrali del tessuto cerebrale embrionale di topo. La linea cellulare è ampiamente riconosciuta per la sua capacità di differenziarsi in cellule neuronali in condizioni sperimentali definite, il che la rende un prezioso modello in vitro per gli studi sulla neurogenesi, lo sviluppo neurale e il commitment del lignaggio neuronale. Le cellule NE-4C presentano le caratteristiche delle cellule progenitrici neurali e possono essere indotte a differenziarsi in cellule simili ai neuroni mediante trattamento con agenti quali l’acido retinoico, determinando cambiamenti morfologici e molecolari associati alla maturazione neuronale.

Durante la differenziazione, le cellule NE-4C sviluppano processi estesi simili a neuriti ed esprimono marcatori neuronali tra cui la βIII-tubulina, la MAP2 e le proteine dei neurofilamenti, a seconda del protocollo di differenziazione impiegato. Grazie al loro comportamento di differenziazione relativamente omogeneo e alla risposta riproducibile agli stimoli induttivi, le cellule NE-4C sono comunemente utilizzate per studiare le vie di segnalazione coinvolte nella specificazione neurale, nello sviluppo sinaptico, nella neurotossicità, nelle risposte allo stress ossidativo e nei meccanismi neuroprotettivi. Il modello è stato applicato anche a studi sui meccanismi delle malattie neurodegenerative, sulla neurobiologia dello sviluppo e sullo screening di composti che influenzano la differenziazione o la sopravvivenza neuronale.

Tessuto
Cervello, neuroectodermico

02Classificazione

Organismo
Mouse
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Neuroepiteliale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
NE-4C (numero di catalogo Cytion 305182)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_B063

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
Sox-2, Otx-2, En-1

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Da 1 a 3 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
C57BL/6 x 129/Sv-Trp53-/-
Età dei donatori
Embrione