Pāriet uz saturu
NE-4C
Audums
Smadzenes, neiroektodermālais

Dokumenti

NE-4C

Cell line · Preces numurs 305182

NE-4C cells are a murine neuroectodermal stem cell line derived from the cerebral vesicles of embryonic mouse brain tissue. The cell line is widely recogn...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

NE-4C šūnas ir peles neiroektodermālo cilmes šūnu līnija, kas iegūta no embrionāla peles smadzeņu auda smadzeņu pūslīšiem. Šī šūnu līnija ir plaši atzīta par tās spēju diferencēties par neironiem noteiktos eksperimentālos apstākļos, tādējādi padarot to par vērtīgu in vitro modeli neiroģenēzes, neiroloģiskās attīstības un neironu ciltskoka specializācijas pētījumiem. NE-4C šūnas uzrāda neironu priekšteču šūnu īpašības, un tās var inducēt diferencēties neironveidīgās šūnās, apstrādājot ar tādiem līdzekļiem kā retinoīnskābe, kas izraisa morfoloģiskas un molekulāras izmaiņas, kas saistītas ar neironu nobriešanu.

Diferencēšanās laikā NE-4C šūnas attīsta izstieptus neirītu līdzīgus izaugumus un ekspresē neironu marķierus, tostarp βIII-tubulīnu, MAP2 un neirofilamentu proteīnus, atkarībā no izmantotā diferenciācijas protokola. Sakarā ar to salīdzinoši viendabīgo diferenciācijas uzvedību un reproducējamo reakciju uz induktīviem stimuliem, NE-4C šūnas parasti izmanto, lai pētītu signālceļus, kas iesaistīti neironu specializācijā, sinaptiskajā attīstībā, neirotoksicitātē, oksidatīvā stresa reakcijās un neiroprotektīvajos mehānismos. Šo modeli ir izmantojuši arī pētījumos par neirodeģeneratīvo slimību mehānismiem, attīstības neirobioloģiju un tādu savienojumu skrīningu, kas ietekmē neironu diferenciāciju vai izdzīvošanu.

Audums
Smadzenes, neiroektodermālais

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Neiroepiteliāls

04Identifikatori

Atsauce
NE-4C (Cytion kataloga numurs 305182)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_B063

05Pazīmes un uzņēmība

Antigēna ekspresija
Sox-2, Otx-2, En-1

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 līdz 3 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Šķirne / pasuga
C57BL/6 x 129/Sv-Trp53-/-
Donora vecums
Embrijs