Cellules NCI-H1299-RFP

Les cellules RFP NCI-H1299, modifiées pour intégrer un gène rapporteur dans le gène DAPK1, sont non seulement utiles pour étudier l’activation de gènes spécifiques, mais elles permettent également de mieux comprendre, de manière globale, comment les cellules réagissent aux médicaments épigénétiques. En utilisant une technique appelée « analyse CAGE » (Cap Analysis of Gene Expression), les chercheurs ont pu détailler les changements dans les sites de début de transcription à l’échelle du génome en réponse à des traitements par DNMTi (DAC), HDACi (SAHA ou SB939) ou leurs combinaisons. Cette méthode révèle non seulement la réactivation attendue du gène DAPK1, mais aussi l’émergence de nouveaux sites d’initiation de la transcription, appelés TSS non annotés induits par le traitement (TINAT), en particulier sous l’effet d’un traitement médicamenteux. Ces nouveaux sites d’initiation sont généralement situés dans des régions du génome qui ne produisent habituellement pas de protéines et conduisent à la création de nouvelles molécules d’ARN susceptibles de coder pour des protéines.

Une analyse plus approfondie montre que ces nouvelles molécules d’ARN peuvent parfois fusionner avec des molécules existantes pour former ce qu’on appelle des transcrits de fusion TINAT-exon. Selon la manière dont ces transcrits sont épissés, ils peuvent se traduire en nouvelles protéines atypiques. Ce processus a été confirmé par des techniques de laboratoire démontrant que ces transcrits peuvent effectivement mener à la production de nouvelles formes protéiques. Ces protéines pourraient interagir de manière anormale au sein de la cellule ou être reconnues comme étrangères par le système immunitaire, offrant ainsi potentiellement de nouvelles cibles pour le traitement du cancer.

L’activation de ces TINAT implique des changements complexes tant au niveau de la méthylation de l’ADN que des modifications des histones, illustrant une interaction complexe entre ces facteurs épigénétiques sous l’effet d’un traitement médicamenteux. En particulier, l’utilisation combinée du DAC et du SB939 se révèle plus efficace, stimulant l’expression de ces nouveaux transcrits davantage que lorsque l’un ou l’autre de ces médicaments est utilisé seul. La compréhension de ces interactions et de leurs conséquences aide à clarifier comment les thérapies épigénétiques modifient le comportement cellulaire et ouvre la voie à de nouveaux traitements contre le cancer qui tirent parti de ces changements moléculaires complexes.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.