เซลล์ NCI-H1299-RFP

เซลล์ NCI-H1299 RFP ที่ถูกดัดแปลงให้มีตัวรายงานในยีน DAPK1 ไม่เพียงแต่มีประโยชน์ในการศึกษาการกระตุ้นยีนเฉพาะเท่านั้น แต่ยังช่วยให้เข้าใจอย่างกว้างขวางขึ้นว่าเซลล์ตอบสนองต่อยาทางอีพีเจเนติกส์อย่างไรในระดับโลกโดยใช้เทคนิคที่เรียกว่า Cap Analysis of Gene Expression (CAGE) นักวิจัยสามารถระบุรายละเอียดการเปลี่ยนแปลงของจุดเริ่มต้นการถอดรหัสทั่วทั้งจีโนมที่ตอบสนองต่อการรักษาด้วย DNMTi (DAC), HDACi (SAHA หรือ SB939) หรือการผสมผสานของทั้งสองได้วิธีนี้ไม่เพียงแต่เผยให้เห็นการกระตุ้นยีน DAPK1 ที่คาดหวังเท่านั้น แต่ยังพบการเกิดขึ้นของจุดเริ่มต้นการถอดรหัสใหม่ ซึ่งเรียกว่าจุดเริ่มต้นการถอดรหัสที่ไม่มีการบันทึกจากการรักษา (TINATs) โดยเฉพาะอย่างยิ่งภายใต้การรักษาด้วยยา จุดเริ่มต้นใหม่เหล่านี้มักอยู่ในบริเวณของจีโนมที่ปกติแล้วไม่ได้ผลิตโปรตีน และนำไปสู่การสร้างโมเลกุล RNA ใหม่ซึ่งอาจเข้ารหัสโปรตีนได้

การวิเคราะห์เพิ่มเติมแสดงให้เห็นว่าโมเลกุล RNA ใหม่เหล่านี้สามารถรวมตัวกับโมเลกุลที่มีอยู่เดิมได้บางครั้งเพื่อสร้างสิ่งที่เรียกว่า TINAT-exon fusion transcripts ขึ้นอยู่กับการตัดต่อของ transcripts เหล่านี้ พวกมันสามารถแปลเป็นโปรตีนใหม่ที่ไม่เป็นไปตามแบบแผนได้ กระบวนการนี้ได้รับการยืนยันผ่านเทคนิคในห้องปฏิบัติการที่แสดงให้เห็นว่า transcripts เหล่านี้สามารถนำไปสู่การผลิตโปรตีนรูปแบบใหม่ได้จริง โปรตีนเหล่านี้อาจมีการโต้ตอบผิดปกติภายในเซลล์หรือถูกระบบภูมิคุ้มกันรับรู้ว่าเป็นสิ่งแปลกปลอม ซึ่งอาจเสนอเป้าหมายใหม่สำหรับการบำบัดโรคมะเร็ง

การกระตุ้นของ TINATs เหล่านี้เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงที่ซับซ้อนทั้งในกระบวนการเมทิลเลชันของดีเอ็นเอและการดัดแปลงฮิสโตน ซึ่งแสดงให้เห็นถึงปฏิสัมพันธ์ที่ซับซ้อนระหว่างปัจจัยเอพิเจเนติกเหล่านี้ภายใต้การรักษาด้วยยา โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การใช้ DAC และ SB939 ร่วมกันแสดงให้เห็นถึงผลลัพธ์ที่มากกว่า โดยเพิ่มการแสดงออกของทรานสคริปต์ใหม่เหล่านี้มากกว่าการใช้ยาเพียงตัวเดียว การทำความเข้าใจปฏิสัมพันธ์เหล่านี้และผลลัพธ์ที่เกิดขึ้นช่วยให้เข้าใจชัดเจนขึ้นว่า การบำบัดด้วยเอพิเจเนติกเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมของเซลล์อย่างไร และเปิดโอกาสใหม่สำหรับการรักษาโรคมะเร็งที่ใช้ประโยชน์จากการเปลี่ยนแปลงระดับโมเลกุลที่ซับซ้อนเหล่านี้

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.