NCI-H1299-RFP Hücreleri

DAPK1 geninde bir raportör içerecek şekilde modifiye edilen NCI-H1299 RFP hücreleri, yalnızca belirli gen aktivasyonunu incelemek için yararlı olmakla kalmıyor, aynı zamanda hücrelerin epigenetik ilaçlara küresel olarak nasıl tepki verdiğine dair daha geniş bir anlayış sağlıyor. Araştırmacılar, Cap Analysis of Gene Expression (CAGE) adı verilen bir teknik kullanarak DNMTi (DAC), HDACi (SAHA veya SB939) veya bunların kombinasyonlarıyla yapılan tedavilere yanıt olarak genom boyunca transkripsiyonun başladığı yerlerdeki değişiklikleri detaylandırabilmişlerdir. Bu yöntem, sadece DAPK1 geninin beklenen yeniden aktivasyonunu değil, aynı zamanda özellikle ilaç tedavisi altında, tedaviye bağlı notlandırılmamış TSS'ler (TINAT'lar) olarak adlandırılan yeni transkripsiyon başlangıç bölgelerinin ortaya çıkışını da ortaya koymaktadır. Bu yeni başlangıç bölgeleri tipik olarak genomun genellikle protein üretmeyen bölgelerinde bulunur ve potansiyel olarak proteinleri kodlayabilecek yeni RNA moleküllerinin oluşmasına yol açar.

Daha ileri analizler, bu yeni RNA moleküllerinin bazen mevcut olanlarla birleşerek TINAT-ekson füzyon transkriptleri olarak bilinen transkriptleri oluşturabileceğini göstermektedir. Bu transkriptlerin nasıl eklendiğine bağlı olarak, yeni, atipik proteinlere dönüşebilirler. Bu süreç, bu transkriptlerin gerçekten de yeni protein formlarının üretimine yol açabileceğini gösteren laboratuvar teknikleriyle doğrulanmıştır. Bu proteinler hücre içinde anormal etkileşime girebilir veya bağışıklık sistemi tarafından yabancı olarak tanınabilir ve potansiyel olarak kanser tedavisi için yeni hedefler sunabilir.

Bu TINAT'ların aktivasyonu, hem DNA metilasyonunda hem de histon modifikasyonlarında karmaşık değişiklikler içerir ve ilaç tedavisi altındaki bu epigenetik faktörler arasında karmaşık bir etkileşim olduğunu gösterir. Özellikle, DAC ve SB939'un birlikte kullanımı, bu yeni transkriptlerin ifadesini her iki ilacın da tek başına kullanılmasından daha fazla artırarak daha büyük bir etki göstermektedir. Bu etkileşimleri ve sonuçlarını anlamak, epigenetik tedavilerin hücre davranışını nasıl değiştirdiğini netleştirmeye yardımcı olur ve bu karmaşık moleküler değişikliklerden yararlanan yeni kanser tedavileri için olanaklar sunar.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın