NCI-H1299-RFP細胞

DAPK1遺伝子のレポーターを含むように改変されたNCI-H1299 RFP細胞は、特定の遺伝子の活性化を研究するのに有用であるだけでなく、細胞がエピジェネティックな薬剤に世界的にどのように反応するかをより広く理解することもできる。CAGE（Cap Analysis of Gene Expression）と呼ばれる手法を用いることで、研究者たちは、DNMTi（DAC）、HDACi（SAHAまたはSB939）、あるいはそれらの組み合わせによる治療に応答して、ゲノム全体で転写が開始される場所の変化を詳細に調べることができた。この方法では、DAPK1遺伝子の再活性化が予想されるだけでなく、特に薬物治療下では、治療誘導非注釈TSS（TINAT）と呼ばれる新たな転写開始部位の出現も明らかになった。これらの新しい転写開始点は、通常タンパク質を産生しないゲノムの領域に位置し、タンパク質をコードする可能性のある新しいRNA分子を作り出す。

さらに分析を進めると、これらの新しいRNA分子は時に既存のRNA分子と融合し、TINAT-エキソン融合転写産物と呼ばれるものを形成することがある。これらの転写物がどのようにスプライシングされるかによって、新しい非定型タンパク質に翻訳される可能性がある。このプロセスは、これらの転写物が実際に新しいタンパク質の産生につながることを示す実験技術によって確認されている。これらのタンパク質は、細胞内で異常に相互作用したり、免疫系によって異物として認識されたりする可能性があり、がん治療の新たな標的となる可能性がある。

これらのTINATの活性化には、DNAメチル化とヒストン修飾の両方における複雑な変化が関与しており、薬物治療下におけるこれらのエピジェネティック因子間の複雑な相互作用を示している。特に、DACとSB939の併用は、どちらか一方の薬剤を単独で使用した場合よりも、これらの新規転写産物の発現を高め、より大きな効果を示した。これらの相互作用とその結果を理解することは、エピジェネティック療法がどのように細胞の挙動を変化させるかを明らかにし、これらの複雑な分子変化を利用した新しいがん治療の可能性を開くのに役立つ。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。