NCI-H1299-RFP-Zellen

Die NCI-H1299 RFP-Zellen, die so modifiziert wurden, dass sie einen Reporter im DAPK1-Gen enthalten, sind nicht nur für die Untersuchung spezifischer Genaktivierung nützlich, sondern ermöglichen auch ein umfassenderes Verständnis der globalen Reaktion von Zellen auf epigenetische Medikamente. Mit Hilfe einer Technik, die als Cap Analysis of Gene Expression (CAGE) bezeichnet wird, waren die Forscher in der Lage, Veränderungen an den Stellen im Genom aufzuzeigen, an denen die Transkription als Reaktion auf eine Behandlung mit DNMTi (DAC), HDACi (SAHA oder SB939) oder deren Kombinationen beginnt. Diese Methode zeigt nicht nur die erwartete Reaktivierung des DAPK1-Gens, sondern auch die Entstehung neuer Transkriptionsstartstellen, so genannter behandlungsinduzierter, nicht annotierter TSSs (TINATs), vor allem unter Medikamentenbehandlung. Diese neuen Startstellen befinden sich in der Regel in Regionen des Genoms, in denen normalerweise keine Proteine gebildet werden, und führen zur Entstehung neuer RNA-Moleküle, die potenziell für Proteine kodieren könnten.

Weitere Analysen zeigen, dass diese neuen RNA-Moleküle manchmal mit bereits vorhandenen fusionieren können, um so genannte TINAT-Exon-Fusionstranskripte zu bilden. Je nachdem, wie diese Transkripte gespleißt werden, können sie zu neuen, atypischen Proteinen werden. Dieser Prozess wurde durch Labortechniken bestätigt, die zeigen, dass diese Transkripte tatsächlich zur Produktion neuer Proteinformen führen können. Diese Proteine könnten innerhalb der Zelle abnorm interagieren oder vom Immunsystem als fremd erkannt werden, was neue Angriffspunkte für die Krebstherapie bieten könnte.

Die Aktivierung dieser TINATs ist mit komplizierten Veränderungen der DNA-Methylierung und der Histon-Modifikationen verbunden, was eine komplexe Interaktion zwischen diesen epigenetischen Faktoren unter medikamentöser Behandlung verdeutlicht. Insbesondere der kombinierte Einsatz von DAC und SB939 zeigt eine größere Wirkung und steigert die Expression dieser neuartigen Transkripte stärker als die alleinige Anwendung eines der beiden Medikamente. Das Verständnis dieser Wechselwirkungen und ihrer Ergebnisse trägt zur Klärung der Frage bei, wie epigenetische Therapien das Zellverhalten verändern, und eröffnet Möglichkeiten für neue Krebsbehandlungen, die sich diese komplexen molekularen Veränderungen zunutze machen.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung