Células NCI-H1299-RFP

As células NCI-H1299 RFP, modificadas para incluir um repórter no gene DAPK1, não só são úteis para estudar a ativação de genes específicos, mas também proporcionam uma compreensão mais ampla de como as células reagem a medicamentos epigenéticos de maneira global. Por meio de uma técnica chamada Análise de Expressão Gênica por Cap (CAGE), os pesquisadores conseguiram detalhar as mudanças nos locais de início da transcrição em todo o genoma em resposta a tratamentos com DNMTi (DAC), HDACi (SAHA ou SB939) ou suas combinações. Esse método revela não apenas a reativação esperada do gene DAPK1, mas também o surgimento de novos locais de início da transcrição, chamados de TSSs não anotados induzidos por tratamento (TINATs), especialmente sob tratamento com medicamentos. Esses novos locais de início estão tipicamente localizados em regiões do genoma que normalmente não produzem proteínas e levam à criação de novas moléculas de RNA que poderiam, potencialmente, codificar proteínas.

Análises adicionais mostram que essas novas moléculas de RNA podem, às vezes, se fundir com as já existentes para formar o que é conhecido como transcritos de fusão TINAT-exon. Dependendo de como esses transcritos são empalmeados, eles podem ser traduzidos em novas proteínas atípicas. Esse processo foi confirmado por meio de técnicas laboratoriais que demonstram que esses transcritos podem, de fato, levar à produção de novas formas de proteínas. Essas proteínas podem interagir de maneira anormal dentro da célula ou ser reconhecidas como estranhas pelo sistema imunológico, oferecendo potencialmente novos alvos para a terapia do câncer.

A ativação desses TINATs envolve mudanças complexas tanto na metilação do DNA quanto nas modificações das histonas, ilustrando uma interação complexa entre esses fatores epigenéticos sob tratamento medicamentoso. Em particular, o uso combinado de DAC e SB939 mostra um efeito maior, aumentando a expressão desses novos transcritos mais do que quando qualquer um dos medicamentos é usado isoladamente. Compreender essas interações e seus resultados ajuda a esclarecer como as terapias epigenéticas alteram o comportamento celular e abre possibilidades para novos tratamentos contra o câncer que aproveitem essas complexas alterações moleculares.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.