Клітини NCI-H1299-RFP

Клітини NCI-H1299 RFP, модифіковані для включення репортера в ген DAPK1, не тільки корисні для вивчення специфічної активації генів, але й забезпечують більш широке розуміння того, як клітини реагують на епігенетичні препарати в усьому світі. Використовуючи методику під назвою Cap Analysis of Gene Expression (CAGE), дослідники змогли детально проаналізувати зміни в місцях початку транскрипції в геномі у відповідь на лікування препаратами DNMTi (DAC), HDACi (SAHA або SB939) або їх комбінаціями. Цей метод виявляє не лише очікувану реактивацію гена DAPK1, але й появу нових сайтів запуску транскрипції, які називаються індукованими лікуванням неанотованими сайтами запуску транскрипції (TSS), особливо під час лікування препаратами. Ці нові сайти, як правило, розташовані в ділянках геному, які зазвичай не продукують білки, і призводять до створення нових молекул РНК, які потенційно можуть кодувати білки.

Подальший аналіз показує, що ці нові молекули РНК іноді можуть зливатися з існуючими, утворюючи так звані транскрипти злиття TINAT-екзонів. Залежно від того, як ці транскрипти зрощуються, вони можуть перетворюватися на нові, нетипові білки. Цей процес був підтверджений лабораторними методами, які демонструють, що ці транскрипти дійсно можуть призводити до утворення нових форм білків. Ці білки можуть аномально взаємодіяти всередині клітини або розпізнаватися імунною системою як чужорідні, потенційно пропонуючи нові мішені для терапії раку.

Активація цих TINAT включає складні зміни в метилюванні ДНК та модифікації гістонів, що ілюструє складну взаємодію між цими епігенетичними факторами під час медикаментозного лікування. Зокрема, комбіноване застосування DAC та SB939 демонструє більший ефект, посилюючи експресію цих нових транскриптів більше, ніж при застосуванні кожного з препаратів окремо. Розуміння цих взаємодій та їх результатів допомагає з'ясувати, як епігенетична терапія змінює поведінку клітин, і відкриває можливості для нових методів лікування раку, які використовують ці складні молекулярні зміни.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>