NCI-H1299-RFP-celler

NCI-H1299 RFP-cellerne, der er modificeret til at indeholde en reporter i DAPK1-genet, er ikke kun nyttige til at studere specifik genaktivering, men giver også en bredere forståelse af, hvordan celler reagerer på epigenetiske lægemidler globalt. Ved at bruge en teknik kaldet Cap Analysis of Gene Expression (CAGE) har forskerne været i stand til at beskrive ændringer i, hvor transkriptionen starter på tværs af genomet som reaktion på behandlinger med DNMTi (DAC), HDACi (SAHA eller SB939) eller kombinationer af disse. Denne metode afslører ikke kun den forventede reaktivering af DAPK1-genet, men også fremkomsten af nye transkriptionsstartsteder, kaldet behandlingsinducerede ikke-annoterede TSS'er (TINAT'er), især under lægemiddelbehandling. Disse nye startsteder er typisk placeret i områder af genomet, der normalt ikke producerer proteiner, og fører til dannelsen af nye RNA-molekyler, der potentielt kan kode for proteiner.

Yderligere analyser viser, at disse nye RNA-molekyler nogle gange kan smelte sammen med eksisterende RNA-molekyler og danne såkaldte TINAT-exon-fusionstranskripter. Afhængigt af, hvordan disse transkripter splejses, kan de oversættes til nye, atypiske proteiner. Denne proces er blevet bekræftet gennem laboratorieteknikker, der viser, at disse transkripter faktisk kan føre til produktion af nye proteinformer. Disse proteiner kan interagere unormalt i cellen eller blive genkendt som fremmede af immunsystemet, hvilket potentielt kan give nye mål for kræftbehandling.

Aktiveringen af disse TINATs involverer indviklede ændringer i både DNA-methylering og histonmodifikationer, hvilket illustrerer et komplekst samspil mellem disse epigenetiske faktorer under lægemiddelbehandling. Især den kombinerede brug af DAC og SB939 viser en større effekt og øger udtrykket af disse nye transkripter mere, end når et af lægemidlerne bruges alene. Forståelsen af disse interaktioner og deres resultater hjælper med at afklare, hvordan epigenetiske terapier ændrer cellernes adfærd, og åbner muligheder for nye kræftbehandlinger, der udnytter disse komplekse molekylære ændringer.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring