Buňky NCI-H1299-RFP

Buňky NCI-H1299 RFP, modifikované tak, aby obsahovaly reportér v genu DAPK1, jsou užitečné nejen pro studium aktivace specifických genů, ale také umožňují širší pochopení toho, jak buňky reagují na epigenetické léky globálně. Pomocí techniky zvané Cap Analysis of Gene Expression (CAGE) byli vědci schopni podrobně popsat změny v místech, kde začíná transkripce napříč genomem v reakci na léčbu DNMTi (DAC), HDACi (SAHA nebo SB939) nebo jejich kombinací. Tato metoda odhaluje nejen očekávanou reaktivaci genu DAPK1, ale také vznik nových míst začátku transkripce, tzv. neanotovaných TSS (TINAT), zejména při léčbě léky. Tato nová startovací místa se obvykle nacházejí v oblastech genomu, kde se obvykle nevytvářejí proteiny, a vedou ke vzniku nových molekul RNA, které by potenciálně mohly kódovat proteiny.

Další analýzy ukazují, že tyto nové molekuly RNA se někdy mohou spojit se stávajícími a vytvořit tak tzv. fúzní transkripty TINAT-exonů. V závislosti na tom, jak jsou tyto transkripty spojeny, se mohou proměnit v nové, netypické proteiny. Tento proces byl potvrzen laboratorními technikami, které prokázaly, že tyto transkripty mohou skutečně vést k produkci nových forem bílkovin. Tyto bílkoviny mohou v buňce abnormálně interagovat nebo mohou být imunitním systémem rozpoznány jako cizí, což může nabídnout nové cíle pro léčbu rakoviny.

Aktivace těchto TINAT zahrnuje složité změny v metylaci DNA i v modifikacích histonů, což ilustruje komplexní interakci mezi těmito epigenetickými faktory při léčbě léky. Zejména kombinované použití DAC a SB939 vykazuje větší účinek a zvyšuje expresi těchto nových transkriptů více, než když je použito jedno z těchto léčiv samostatně. Pochopení těchto interakcí a jejich výsledků pomáhá objasnit, jak epigenetické terapie mění chování buněk, a otevírá možnosti pro nové způsoby léčby rakoviny, které tyto komplexní molekulární změny využívají.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení