NCI-H1299-RFP-celler

NCI-H1299 RFP-cellene, som er modifisert til å inkludere en reporter i DAPK1-genet, er ikke bare nyttige for å studere spesifikk genaktivering, men gir også en bredere forståelse av hvordan celler reagerer på epigenetiske legemidler globalt. Ved hjelp av en teknikk som kalles Cap Analysis of Gene Expression (CAGE), har forskerne kunnet kartlegge endringer i hvor transkripsjonen starter på tvers av genomet som respons på behandling med DNMTi (DAC), HDACi (SAHA eller SB939) eller kombinasjoner av disse. Denne metoden avslører ikke bare den forventede reaktiveringen av DAPK1-genet, men også fremveksten av nye transkripsjonsstartsteder, kalt behandlingsinduserte ikke-annoterte TSS-er (TINAT-er), spesielt under medikamentell behandling. Disse nye startstedene er vanligvis lokalisert i områder av genomet som vanligvis ikke produserer proteiner, og fører til dannelsen av nye RNA-molekyler som potensielt kan kode for proteiner.

Videre analyser viser at disse nye RNA-molekylene noen ganger kan slå seg sammen med eksisterende RNA-molekyler og danne såkalte TINAT-ekson-fusjonstranskripter. Avhengig av hvordan disse transkripsjonene spleises, kan de oversettes til nye, atypiske proteiner. Denne prosessen har blitt bekreftet gjennom laboratorieteknikker som viser at disse transkripsjonene faktisk kan føre til produksjon av nye proteinformer. Disse proteinene kan interagere unormalt i cellen eller bli gjenkjent som fremmede av immunforsvaret, noe som potensielt kan gi nye mål for kreftbehandling.

Aktiveringen av disse TINAT-ene innebærer kompliserte endringer i både DNA-metylering og histonmodifikasjoner, noe som illustrerer et komplekst samspill mellom disse epigenetiske faktorene under medikamentell behandling. Spesielt viser den kombinerte bruken av DAC og SB939 en større effekt, og øker uttrykket av disse nye transkripsjonene mer enn når et av medikamentene brukes alene. Forståelsen av disse interaksjonene og resultatene av dem bidrar til å klargjøre hvordan epigenetiske terapier endrer cellenes atferd, og åpner for muligheter for nye kreftbehandlinger som utnytter disse komplekse molekylære endringene.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring