Cellule NCI-H1299-RFP

Le cellule NCI-H1299 RFP, modificate per includere un reporter nel gene DAPK1, non sono solo utili per studiare l'attivazione di un gene specifico, ma forniscono anche una comprensione più ampia di come le cellule reagiscono ai farmaci epigenetici a livello globale. Utilizzando una tecnica chiamata Cap Analysis of Gene Expression (CAGE), i ricercatori sono stati in grado di dettagliare i cambiamenti nei punti di inizio della trascrizione all'interno del genoma in risposta ai trattamenti con DNMTi (DAC), HDACi (SAHA o SB939) o alle loro combinazioni. Questo metodo rivela non solo l'attesa riattivazione del gene DAPK1, ma anche l'emergere di nuovi siti di inizio della trascrizione, chiamati TSS non annotati indotti dal trattamento (TINAT), soprattutto in caso di trattamento farmacologico. Questi nuovi siti di inizio sono tipicamente situati in regioni del genoma che di solito non producono proteine e portano alla creazione di nuove molecole di RNA che potrebbero potenzialmente codificare per le proteine.

Ulteriori analisi mostrano che queste nuove molecole di RNA possono talvolta fondersi con quelle esistenti per formare i cosiddetti trascritti di fusione TINAT-esone. A seconda del modo in cui questi trascritti vengono impiantati, possono tradursi in nuove proteine atipiche. Questo processo è stato confermato da tecniche di laboratorio che dimostrano che questi trascritti possono effettivamente portare alla produzione di nuove forme proteiche. Queste proteine potrebbero interagire in modo anomalo all'interno della cellula o essere riconosciute come estranee dal sistema immunitario, offrendo potenzialmente nuovi bersagli per la terapia del cancro.

L'attivazione di queste TINAT comporta intricati cambiamenti sia nella metilazione del DNA che nelle modificazioni degli istoni, illustrando una complessa interazione tra questi fattori epigenetici durante il trattamento farmacologico. In particolare, l'uso combinato di DAC e SB939 mostra un effetto maggiore, aumentando l'espressione di questi nuovi trascritti più che quando uno dei due farmaci è usato da solo. La comprensione di queste interazioni e dei loro risultati aiuta a chiarire come le terapie epigenetiche alterino il comportamento delle cellule e apre la possibilità di nuovi trattamenti antitumorali che sfruttino questi complessi cambiamenti molecolari.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia