NCI-H1299-RFP-solut

NCI-H1299 RFP -solut, jotka on muunnettu siten, että ne sisältävät DAPK1-geenin reportterin, eivät ole hyödyllisiä ainoastaan tietyn geenin aktivoitumisen tutkimisessa, vaan ne antavat myös laajemman käsityksen siitä, miten solut reagoivat epigeneettisiin lääkkeisiin maailmanlaajuisesti. Käyttämällä Cap Analysis of Gene Expression (CAGE) -tekniikkaa tutkijat ovat pystyneet selvittämään yksityiskohtaisesti muutokset siinä, missä transkriptio alkaa koko genomissa, kun he saavat hoitoja DNMTi:llä (DAC), HDACi:lla (SAHA tai SB939) tai niiden yhdistelmillä. Menetelmä paljastaa DAPK1-geenin odotetun uudelleenaktivoitumisen lisäksi myös uusien transkription aloituskohtien, joita kutsutaan hoidon aiheuttamiksi ei-annotoiduiksi TSS-kohdiksi (TINAT), syntymisen erityisesti lääkehoidon yhteydessä. Nämä uudet aloituskohdat sijaitsevat tyypillisesti genomin alueilla, jotka eivät yleensä tuota proteiineja, ja ne johtavat sellaisten uusien RNA-molekyylien syntyyn, jotka voisivat mahdollisesti koodata proteiineja.

Tarkempi analyysi osoittaa, että nämä uudet RNA-molekyylit voivat joskus yhdistyä olemassa oleviin molekyyleihin muodostaen niin sanottuja TINAT-exon-fuusio-transkriptejä. Riippuen siitä, miten nämä transkriptit liitetään, ne voivat kääntyä uusiksi epätyypillisiksi proteiineiksi. Tämä prosessi on vahvistettu laboratoriotekniikoilla, jotka osoittavat, että nämä transkriptit voivat todellakin johtaa uusien proteiinimuotojen tuotantoon. Nämä proteiinit voivat olla epänormaalissa vuorovaikutuksessa solun sisällä tai immuunijärjestelmä voi tunnistaa ne vieraiksi, mikä voi tarjota uusia kohteita syöpähoitoon.

Näiden TINATien aktivoitumiseen liittyy monimutkaisia muutoksia sekä DNA-metylaatiossa että histonimodifikaatioissa, mikä osoittaa näiden epigeneettisten tekijöiden monimutkaisen vuorovaikutuksen lääkehoidon yhteydessä. Erityisesti DAC:n ja SB939:n yhdistelmäkäytöllä on suurempi vaikutus, sillä se lisää näiden uusien transkriptien ilmentymistä enemmän kuin kumpaakin lääkettä yksinään käytettäessä. Näiden vuorovaikutusten ja niiden tulosten ymmärtäminen auttaa selventämään, miten epigeneettiset hoidot muuttavat solujen käyttäytymistä, ja avaa mahdollisuuksia uusille syöpähoidoille, jotka hyödyntävät näitä monimutkaisia molekyylimuutoksia.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa