Células NCI-H1299-RFP

As células NCI-H1299 RFP, modificadas para incluir um repórter no gene DAPK1, não só são úteis para estudar a ativação de genes específicos, como também permitem uma compreensão mais ampla da forma como as células reagem globalmente aos fármacos epigenéticos. Utilizando uma técnica chamada Cap Analysis of Gene Expression (CAGE), os investigadores conseguiram detalhar as alterações no local onde a transcrição começa no genoma em resposta a tratamentos com DNMTi (DAC), HDACi (SAHA ou SB939), ou as suas combinações. Este método revela não só a reativação esperada do gene DAPK1, mas também o aparecimento de novos locais de início da transcrição, denominados TSSs não anotados induzidos pelo tratamento (TINATs), especialmente sob tratamento medicamentoso. Estes novos locais de início estão normalmente localizados em regiões do genoma que não produzem proteínas e conduzem à criação de novas moléculas de ARN que podem potencialmente codificar proteínas.

Uma análise mais aprofundada mostra que estas novas moléculas de ARN podem, por vezes, fundir-se com outras já existentes, formando o que se designa por transcritos de fusão TINAT-exão. Dependendo da forma como estas transcrições são emendadas, podem traduzir-se em novas proteínas atípicas. Este processo foi confirmado através de técnicas laboratoriais que demonstram que estas transcrições podem efetivamente levar à produção de novas formas proteicas. Estas proteínas podem interagir de forma anormal no interior da célula ou ser reconhecidas como estranhas pelo sistema imunitário, oferecendo potencialmente novos alvos para a terapia do cancro.

A ativação destes TINATs envolve alterações intrincadas tanto na metilação do ADN como nas modificações das histonas, ilustrando uma interação complexa entre estes factores epigenéticos sob tratamento medicamentoso. Em particular, o uso combinado de DAC e SB939 mostra um efeito maior, aumentando a expressão desses novos transcritos mais do que quando qualquer um dos medicamentos é usado sozinho. A compreensão destas interações e dos seus resultados ajuda a clarificar a forma como as terapias epigenéticas alteram o comportamento das células e abre possibilidades para novos tratamentos contra o cancro que potenciem estas complexas alterações moleculares.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia