תאי NCI-H1299-RFP

תאי NCI-H1299 RFP, שעברו שינוי כדי לכלול גן DAPK1, אינם שימושיים רק לחקר הפעלת גנים ספציפיים, אלא גם מספקים הבנה רחבה יותר של האופן שבו תאים מגיבים לתרופות אפיגנטיות באופן כללי. באמצעות טכניקה המכונה Cap Analysis of Gene Expression (CAGE), הצליחו החוקרים לפרט את השינויים במיקום תחילת השעתוק בגנום בתגובה לטיפולים ב-DNMTi (DAC), HDACi (SAHA או SB939) או שילובים שלהם. שיטה זו חושפת לא רק את ההפעלה הצפויה של הגן DAPK1, אלא גם את הופעתם של אתרי התחלת שעתוק חדשים, המכונים TSSs (TINATs) שאינם מתועדים המושרים על ידי טיפול, במיוחד תחת טיפול תרופתי. אתרי התחלה חדשים אלה ממוקמים בדרך כלל באזורים בגנום שאינם מייצרים בדרך כלל חלבונים ומובילים ליצירת מולקולות RNA חדשות שעשויות לקודד חלבונים.

ניתוח נוסף מראה כי מולקולות RNA חדשות אלה יכולות לעיתים להתמזג עם מולקולות קיימות כדי ליצור מה שמכונה "תמלילי TINAT-exon fusion". בהתאם לאופן שבו תמלילים אלה מחוברים, הם יכולים להתורגם לחלבונים חדשים ולא טיפוסיים. תהליך זה אושר באמצעות טכניקות מעבדה המדגימות שתמלילים אלה אכן יכולים להוביל לייצור צורות חלבון חדשות. חלבונים אלה עשויים לקיים אינטראקציה חריגה בתוך התא או להיות מזוהים כזרים על ידי מערכת החיסון, ובכך להציע יעדים חדשים לטיפול בסרטן.

הפעלת ה-TINATs כרוכה בשינויים מורכבים הן במתילציה של ה-DNA והן בשינויים בהיסטונים, מה שממחיש את האינטראקציה המורכבת בין גורמים אפיגנטיים אלה תחת טיפול תרופתי. בפרט, השימוש המשולב ב-DAC ו-SB939 מראה השפעה גדולה יותר, ומגביר את הביטוי של תמלילים חדשים אלה יותר מאשר כאשר כל אחת מהתרופות משמשת לבדה. הבנת אינטראקציות אלה ותוצאותיהן מסייעת להבהיר כיצד טיפולים אפיגנטיים משנים את התנהגות התאים ופותחת אפשרויות לטיפולים חדשים בסרטן המנצלים שינויים מולקולריים מורכבים אלה.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו