خلايا NCI-H1299-RFP

لا تقتصر فائدة خلايا NCI-H1299 RFP، التي تم تعديلها لتشمل مُرسلاً في جين DAPK1، على دراسة تنشيط جينات محددة فحسب، بل توفر أيضًا فهمًا أوسع لكيفية تفاعل الخلايا مع الأدوية اللاجينية على مستوى العالم. وباستخدام تقنية تُسمى تحليل كاب للتعبير الجيني (CAGE)، تمكن الباحثون من تفصيل التغيرات في أماكن بدء النسخ عبر الجينوم استجابةً للعلاجات باستخدام DNMTi (DAC) أو HDACi (SAHA أو SB939) أو توليفاتهما. لا تكشف هذه الطريقة عن إعادة التنشيط المتوقعة لجين DAPK1 فحسب، بل تكشف أيضًا عن ظهور مواقع بدء النسخ الجديدة، والتي تسمى TSSs غير المُشار إليها بالعلاج (TINATs)، خاصةً في ظل العلاج بالعقاقير. عادةً ما تقع مواقع البدء الجديدة هذه في مناطق من الجينوم لا تنتج عادةً بروتينات وتؤدي إلى إنشاء جزيئات جديدة من الحمض النووي الريبي يمكن أن ترمز إلى بروتينات.

ويُظهر المزيد من التحليل أن جزيئات الحمض النووي الريبوزي الجديدة هذه يمكن أن تندمج في بعض الأحيان مع الجزيئات الموجودة لتكوين ما يُعرف بنصوص اندماج TINAT-إيكون. واعتماداً على كيفية تقسيم هذه النسخ يمكن أن تترجم إلى بروتينات جديدة غير نمطية. وقد تم التأكد من هذه العملية من خلال التقنيات المختبرية التي تثبت أن هذه النسخ يمكن أن تؤدي بالفعل إلى إنتاج أشكال بروتينية جديدة. قد تتفاعل هذه البروتينات بشكل غير طبيعي داخل الخلية أو قد يتعرف عليها الجهاز المناعي على أنها غريبة عن الخلية، مما قد يوفر أهدافًا جديدة لعلاج السرطان.

ينطوي تنشيط هذه البروتينات على تغيرات معقدة في كل من مثيلة الحمض النووي وتعديلات الهيستون، مما يوضح وجود تفاعل معقد بين هذه العوامل اللاجينية تحت العلاج الدوائي. وعلى وجه الخصوص، يُظهر الاستخدام المشترك لعقار DAC و SB939 تأثيرًا أكبر، حيث يعزز التعبير عن هذه النسخ الجديدة أكثر من استخدام أي من العقارين بمفرده. ويساعد فهم هذه التفاعلات ونتائجها في توضيح كيفية تغيير العلاجات اللاجينية لسلوك الخلايا ويفتح إمكانيات لعلاجات جديدة للسرطان تستفيد من هذه التغيرات الجزيئية المعقدة.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان