- Tissue
- Peau
- Disease
- Fibroblastes cutanés normaux (immortalisés par le SV40; non tumorigènes)
- Metastatic site
- Sans objet (lignée de fibroblastes normale; il ne s'agit pas d'un échantillon tumoral)
- Synonyms
- SV-80, SV 80, SV-A clone 80, SV clone 80, Simian virus 80
Documents
01General information
- Description
- Cette lignée transformée par le SV40 a été initialement générée à partir de cellules issues d’une biopsie cutanée d’une femme adulte (souche A) par Todaro et al. en 1963, et non à partir de tissu pulmonaire d’un fœtus masculin âgé de cinq mois (souche C). Après l’infection, la morphologie des colonies en croissance a évolué, donnant lieu à des colonies de type fibroblastique et épithélioïde. L’attribution à la souche SV-80 d’une origine pulmonaire, qui a ensuite été conservée, était très probablement erronée. Toutefois, cette lignée cellulaire fera l’objet d’une caractérisation plus approfondie en ce qui concerne l’antigène p53 et la présence de l’antigène T de grande taille.
- Tissue
- Peau
- Disease
- Fibroblastes cutanés normaux (immortalisés par le SV40; non tumorigènes)
- Metastatic site
- Sans objet (lignée de fibroblastes normale; il ne s'agit pas d'un échantillon tumoral)
- Applications
- Recherche sur la réparation de l'ADN; biologie des fibroblastes immortalisés par le SV40; cytogénétique; essais de génotoxicité; référence de fibroblastes humains normaux pour les études comparatives sur le cancer; biologie de l'antigène T majeur du SV40
- Synonyms
- SV-80
- SV 80
- SV-A clone 80
- SV clone 80
- Simian virus 80
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This SV-80 human fibroblast line contains SV40 T-antigen sequences enabling immortalization for DNA repair and cytogenetics research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De type épithélial
- Cell type
- Fibroblaste
- Tumourigenic
- SMRV : Négatif, tel que confirmé par PCR en temps réel
- Karyotype
- Nombre modal = 76, intervalle = de 52 à 87
- Doubling time
- de 20 à 24 heures
04Identifiers
- Citation
- SV-80 (numéro de catalogue Cytion 300345)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_0541
05Handling and culture
- Culture medium
- DMEM, p/v : 4,5 g/L de glucose, p/v : 4 mM de L-glutamine, p/v : 3,7 g/L de NaHCO₃, p/v : 1,0 mM de pyruvate de sodium (référence Cytion 820300a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmosphère humidifiée.
- Supplements
- Ajouter 10 % de FBS au milieu de culture
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Retirez l’ancien milieu des cellules adhérentes et lavez-les avec du PBS sans calcium ni magnésium. Pour les flacons T25, utilisez 3 à 5 ml de PBS, et pour les flacons T75, utilisez 5 à 10 ml. Ensuite, recouvrez complètement les cellules d’Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laissez les cellules incuber à température ambiante pendant 8 à 10 minutes afin de les détacher. Après l’incubation, mélangez délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifugez à 300 x g pendant 3 minutes. Éliminez le surnageant, remettez les cellules en suspension dans du milieu frais, puis transférez-les dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
- Split ratio
- 1 à 5
- Seeding density
- de 3 à 5 × 10³ cellules/cm²
- Fluid renewal
- 1 à 2 fois par semaine
- Post-thaw recovery
- Rapide
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Quality control and cryopreservation
- Sterility
La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.
Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.
- Freeze medium
- Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (contenant du sérum fœtal bovin) + 10 % de DMSO pour assurer une viabilité adéquate après décongélation, ou du CM-1 (référence Cytion 800100), qui contient des osmoprotecteurs et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryoconservation.
- Storage conditions
Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.
- Shipping conditions
Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.
07Donor
- Donor age
- Adulte
- Ethnicity
- caucasien
08Legal and safety
- Safety precautions
- Lorsqu’on prévoit entreposer un cryotube dans de l’azote liquide en vue d’une décongélation ultérieure, il est impératif de respecter des mesures de sécurité rigoureuses. Le port de gants et de vêtements de protection appropriés est essentiel, et l’utilisation d’un masque facial ou de lunettes de protection est obligatoire lors du transfert d’échantillons congelés vers ou depuis le réservoir d’azote liquide. Cette précaution vise à réduire le risque de blessure causé par d’éventuelles explosions de cryotubes lors de leur retrait, pouvant entraîner la projection de fragments coupants.
- Warranty
Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.
Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.
- Material Transfer Agreement required
- Yes