NRK-EGFP3-Seh1

A linhagem celular NRK-EGFP3-Seh1 é uma linhagem clonal estável derivada de células renais normais de rato (NRK). Essa linhagem celular foi gerada por meio da transfecção de um plasmídeo circular que codifica a proteína de fusão EGFP3-Seh1. Após a transfecção, as células foram selecionadas quanto à resistência a medicamentos, garantindo o estabelecimento de uma população estável que expressa a construção desejada.

Aproximadamente 50% das células dessa população expressam EGFP3-Seh1, uma proteína de fusão que combina a proteína fluorescente verde aprimorada (EGFP) com Seh1, um componente proteico do complexo de poros nucleares. A presença de EGFP facilita a visualização e o rastreamento da proteína de fusão dentro das células, permitindo que os pesquisadores estudem a dinâmica e a função da Seh1 em vários processos celulares. No entanto, a expressão de EGFP3-Seh1 nessa linhagem celular apresenta certa variação, indicando variabilidade nos níveis de expressão entre as células individuais da população.

Essa linhagem celular é particularmente útil para estudos envolvendo a montagem do complexo de poros nucleares, o transporte nucleocitoplasmático e o papel da Seh1 nesses processos. A fluorescência proporcionada pela EGFP permite a obtenção de imagens de células vivas e a análise em tempo real da localização e das interações das proteínas, tornando a NRK-EGFP3-Seh1 uma ferramenta valiosa para a biologia celular e a pesquisa molecular.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.