NRK-EGFP3-Seh1

La linea cellulare NRK-EGFP3-Seh1 è una linea clonale stabile derivata da cellule di rene normale di ratto (NRK). Questa linea cellulare è stata generata mediante la trasfezione di un plasmide circolare che codifica la proteina di fusione EGFP3-Seh1. Dopo la trasfezione, le cellule sono state selezionate per la resistenza ai farmaci, assicurando la creazione di una popolazione stabile che esprime il costrutto desiderato.

Circa il 50% delle cellule di questa popolazione esprime EGFP3-Seh1, una proteina di fusione che combina la proteina fluorescente verde potenziata (EGFP) con Seh1, una proteina componente del complesso del poro nucleare. La presenza di EGFP facilita la visualizzazione e il tracciamento della proteina di fusione all'interno delle cellule, consentendo ai ricercatori di studiare la dinamica e la funzione di Seh1 in vari processi cellulari. Tuttavia, l'espressione di EGFP3-Seh1 in questa linea cellulare presenta una certa variegatura, indicando una variabilità nei livelli di espressione tra le singole cellule della popolazione.

Questa linea cellulare è particolarmente utile per studi che riguardano l'assemblaggio del complesso del poro nucleare, il trasporto nucleocitoplasmatico e il ruolo di Seh1 in questi processi. La fluorescenza fornita da EGFP consente l'imaging di cellule vive e l'analisi in tempo reale della localizzazione e delle interazioni delle proteine, rendendo NRK-EGFP3-Seh1 uno strumento prezioso per la biologia cellulare e la ricerca molecolare.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia