Přejít na obsah
Buňky HT-29
Tkáň
Střeva
Nemoc
Adenokarcinom
Synonyma
HT 29, HT29

Dokumenty

Buňky HT-29

Cell line · Číslo výrobku 300215

Buněčná linie HT-29, odvozená z lidského adenokarcinomu tlustého střeva stupně II, představuje základní výzkumný model ve studiu rakoviny lidského tlustého střeva....

€430.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis

Buněčná linie HT-29, odvozená z lidského kolorektálního adenokarcinomu II. stupně, představuje základní výzkumný model při studiu lidských nádorů tlustého střeva. Buňky HT22, odvozené z primárního nádoru 44leté ženy v roce 1964, se významně podílely na pokroku v poznání mechanismů adheze nebo invaze nádorových buněk. Jako buněčná linie lidského adenokarcinomu vykazují buňky HT-29 vlastnosti, které věrně napodobují zralé střevní buňky, jako jsou enterocyty, což podtrhuje jejich užitečnost při zkoumání dynamiky trávení potravy a biologické dostupnosti živin.

Buňky HT-29 jsou citlivé na konvenční chemoterapii kolorektálního karcinomu, včetně 5-fluorouracilu a oxaliplatiny. Tato citlivost spolu s jejich schopností exprimovat diferenciační dráhy za specifických podmínek, jako je deprivace glukózy nebo léčba induktory, jako je butyrát, z nich činí neocenitelný model pro zkoumání molekulárních mechanismů, které jsou základem diferenciace buněk a progrese rakoviny.

Buňky HT-29 byly navíc využity jako xenografický model nádoru, což poskytuje platformu pro studie in vivo, které napodobují chování nádoru v lidském těle. Toto použití umožňuje zkoumat růst nádoru, metastazování a účinnost terapeutických látek v situacích in vivo.

Lze shrnout, že buněčná linie HT-29 je klíčovým nástrojem v lékařském a biologickém výzkumu, který usnadňuje hlubší pochopení lidského adenokarcinomu tlustého střeva, molekulární podstaty diferenciace nádorových buněk a vývoje účinných způsobů léčby rakoviny.

Tkáň
Střeva
Nemoc
Adenokarcinom
Synonyma
  • HT 29
  • HT29

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Žena
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelu podobné
Tumorogenní
Ano, na nahých myších. Tvoří dobře diferencovaný adenokarcinom odpovídající primárnímu nádoru tlustého střeva (stupeň I), nádory se tvoří také u křečků léčených steroidy
Karyotyp
Počet kmenových chromozomů je hypertriploidní s 2S složkou vyskytující se ve 2,4 %. Ve většině metafází se nachází sedmnáct markerových chromozomů, obvykle v jedné kopii na chromozom. Označení markerů je následující: M1p-(=t(3p-,?) s odstraněným krátkým ramenem), t(7q,?), t(10q,?), i(13q), 19q+a. M6, ?t(8q,9q-), ?xp, M9, 6q+, t(13,?)a, t(13,?)b, 19q+b, M14, M15, 15p+ a xq-. Chromozom 13 je nullisomický a chromozomy 8 a 14 jsou obecně monosomické. QM pásmovou analýzou nebyl zjištěn žádný chromozom Y.
Doba zdvojnásobení
24 hodin

04Identifikátory

Citace
HT-29 (katalogové číslo Cytion 300215)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0320

05Exprese a náchylnost

Exprimované receptory
Receptor pro urokinázu (u-PAR), vitamin D (mírná exprese), aktivita aktivátoru plazminogenu není detekovatelná.
Exprese proteinů
CEA negativní, p53 pozitivní
Exprese antigenu
Krevní typ A, Rh+, HLA A1, A3, B12, B17, Cw5, CD4 -, exprese galaktózového ceramidu na povrchu buněk (možný alternativní receptor pro HIV)
Isoenzymy
Me-2, 1, PGM3, 1-2, PGM1, 1-2, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1-2, G6PD, B, produkt fenotypové frekvence: 0.0230
Onkogeny
Myc+, ras+, myb+, fos+, sis+, p53+, abl -, ros -, src -
Náchylnost k virům
Virus lidské imunodeficience (HIV, LAV)
Produkty
Sekreční složka IgA, karcinoembryonální antigen (CEA), vazebný protein transformujícího růstového faktoru beta, mucin, Nadměrná produkce antigenu p53

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/l NaHCO3, w: EBSS (číslo článku Cytion 820100a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS a 1 % NEAA
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Hustota výsevu
3 x 104 buněk/cm2
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Pomalu, buňky potřebují zhruba 48 hodin, aby se usadily a přilnuly.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
44 let
Etnická příslušnost
Kavkazský