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Cellule HT-29
Tessuto
Colon
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
HT 29, HT29

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Cellule HT-29

Cell line · Codice prodotto 300215

La linea cellulare HT-29, derivata da un adenocarcinoma colorettale umano di grado II, rappresenta un modello di ricerca fondamentale nello studio dei tumori del colon nell'uomo....

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HT-29, derivata da un adenocarcinoma colorettale umano di grado II, rappresenta un modello di ricerca fondamentale nello studio dei tumori del colon umani. Derivate da un tumore primario di una donna di 44 anni nel 1964, le cellule HT22 sono state fondamentali per la comprensione dei meccanismi di adesione e invasione delle cellule tumorali. Come linea cellulare di adenocarcinoma umano, le cellule HT-29 presentano caratteristiche che imitano da vicino quelle delle cellule intestinali mature, come gli enterociti, sottolineando la loro utilità nell'esplorare le dinamiche della digestione del cibo e della biodisponibilità dei nutrienti.

Le cellule HT-29 sono sensibili ai chemioterapici convenzionali per il cancro colorettale, tra cui il 5-fluorouracile e l'oxaliplatino. Questa sensibilità, unita alla loro capacità di esprimere percorsi di differenziazione in condizioni specifiche, come la privazione di glucosio o il trattamento con induttori come il butirrato, le rende un modello prezioso per studiare i meccanismi molecolari alla base del differenziamento cellulare e della progressione del cancro.

Inoltre, le cellule HT-29 sono state utilizzate come modello di xenotrapianto tumorale, fornendo una piattaforma per studi in vivo che imitano il comportamento del tumore nel corpo umano. Questa applicazione consente di esplorare la crescita del tumore, le metastasi e l'efficacia degli agenti terapeutici in situazioni in vivo.

In sintesi, la linea cellulare HT-29 è uno strumento fondamentale per la ricerca medica e biologica, che facilita una comprensione più approfondita dell'adenocarcinoma del colon umano, delle basi molecolari della differenziazione delle cellule tumorali e dello sviluppo di trattamenti antitumorali efficaci.

Tessuto
Colon
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
  • HT 29
  • HT29

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi. Forma un adenocarcinoma ben differenziato coerente con il primitivo del colon (grado I); si formano tumori anche in criceti trattati con steroidi
Cariotipo
Il numero di cromosomi della linea staminale è ipertriploide, con la componente 2S presente al 2,4%. Nella maggior parte delle metafasi si trovano diciassette cromosomi marcatori, generalmente in copia singola per cromosoma. Le denominazioni dei marcatori sono: M1p-(=t(3p-,?) con un braccio corto cancellato), t(7q,?), t(10q,?), i(13q), 19q+a. M6, t(8q,9q-), xp, M9, 6q+, t(13,?)a, t(13,?)b, 19q+b, M14, M15, 15p+ e xq-. Il cromosoma 13 è nullisomico e i cromosomi 8 e 14 sono generalmente monosomici. L'analisi delle bande QM non ha rilevato alcun cromosoma Y.
Tempo di raddoppio
24 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HT-29 (numero di catalogo Cytion 300215)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0320

05Espressione e suscettibilità

Recettori espressi
Recettore dell'urochinasi (u-PAR), vitamina D (espressione moderata), nessuna attività di attivatore del plasminogeno rilevabile.
Espressione proteica
CEA negativo, p53 positivo
Espressione dell'antigene
Gruppo sanguigno A, Rh+, HLA A1, A3, B12, B17, Cw5, CD4 -, espressione della superficie cellulare del galattosio ceramide (un possibile recettore alternativo per l'HIV)
Isoenzimi
Me-2, 1, PGM3, 1-2, PGM1, 1-2, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1-2, G6PD, B, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0230
Oncogeni
Myc+, ras+, myb+, fos+, sis+, p53+, abl -, ros -, src -
Suscettibilità ai virus
Virus dell'immunodeficienza umana (HIV, LAV)
Prodotti
Componente secretoria di IgA, antigene carcinoembrionale (CEA), proteina legante il fattore di crescita beta trasformante, mucina, L'antigene p53 è iperprodotto

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
3 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Lentamente, le cellule hanno bisogno di circa 48 ore per depositarsi e aderire.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
44 anni
Etnia
Caucasico