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HROG06 T0 M2
Gewebe
Gehirn
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Glioblastom

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HROG06 T0 M2

Cell line · Artikelnummer 300883

HROG06 T0 M2 ist eine primäre menschliche Glioblastoma-multiforme (GBM)-Zelllinie, die aus frisch entnommenem Tumorgewebe eines erwachsenen Patienten gewonnen wurde, bei dem … diagnostiziert wurde.

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HROG06 T0 M2 ist eine primäre humane Glioblastoma multiforme (GBM)-Zelllinie, die aus frisch reseziertem Tumorgewebe eines erwachsenen Patienten gewonnen wurde, bei dem ein Glioblastom des WHO-Grades IV diagnostiziert wurde. Die Bezeichnung „T0” gibt an, dass die Tumorprobe bei der ersten chirurgischen Intervention entnommen wurde, während „M2” sich auf das zweite unabhängig erzeugte In-vitro-Modell bezieht, das aus demselben Primärtumor gewonnen wurde. Die Zelllinie wurde innerhalb der HROG-Plattform (Hansestadt Rostock Glioma) entwickelt, die sich auf die Erzeugung von Gliomkulturen mit extrem niedriger Passagenzahl konzentriert, die die biologischen und molekularen Eigenschaften des ursprünglichen Tumors des Patienten bewahren.

HROG06 T0 M2 wächst unter standardisierten Kulturbedingungen adhärent und weist eine spindelförmige, fibroblastenähnliche Morphologie auf, die typisch für primäre GBM-Kulturen ist. Immunphänotypische Analysen der HROG-Serie zeigen die Expression von Markern der neuralen und glialen Linie wie gliales fibrilläres saures Protein (GFAP), Nestin und Vimentin, was den astrozytären Ursprung des Tumors bestätigt. Die molekulare Charakterisierung innerhalb der HROG-Plattform umfasst die Bewertung klinisch relevanter Biomarker wie den MGMT-Promotor-Methylierungsstatus, die EGFR-Amplifikation und das Mutationsprofil von Genen wie TP53, IDH1/2, KRAS und BRAF, wodurch die Erhaltung tumorassoziierter genomischer Veränderungen in Kulturen früher Passagen bestätigt wird.

HROG06 T0 M2 wurde für die In-vitro-Bewertung der therapeutischen Reaktionen auf Standardbehandlungen von Glioblastomen verwendet, darunter alkylierende Chemotherapeutika sowie gezielte Inhibitoren. Vergleichende Analysen innerhalb der HROG-Sammlung zeigen eine stabile Morphologie, reproduzierbare Wachstumskinetik und konsistente Arzneimittelsensitivitätsprofile in frühen Passagen, was seine Eignung als translationales Forschungsmodell untermauert. Als patientenabgeleitete GBM-Zelllinie mit geringer Passagenzahl bietet HROG06 T0 M2 eine klinisch relevante Plattform für die Untersuchung der Biologie des Glioblastoms, der Tumorheterogenität und der Mechanismen der Therapieresistenz.

Gewebe
Gehirn
Krankheit
Glioblastom

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Bezeichner

Quellenangabe
HROG06 T0 M2 (Cytion Katalognummer 300883)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FP

04Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir 50 % Basalmedium + 40 % FBS + 10 % DMSO oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektiva und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und den kryoinduzierten Stress zu verringern.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

06Spender

Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch