Preskoči na vsebino
HROG06 T0 M2
Tkivo
Možgani
Bolezen
Glioblastom

Dokumenti

HROG06 T0 M2

Cell line · Številka izdelka 300883

HROG06 T0 M2 je primarna celična linija človeškega glioblastoma multiforme (GBM), vzpostavljena iz sveže odstranjenega tumorskega tkiva odraslega bolnika, pri katerem je bila diagnosticirana ...

€800.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
1

01Splošne informacije

Opis

HROG06 T0 M2 je primarna človeška celična linija glioblastoma multiforme (GBM), vzpostavljena iz sveže odstranjenega tumorja odraslega pacienta, pri katerem je bila diagnosticirana glioblastoma stopnje IV po klasifikaciji WHO. Oznaka „T0“ pomeni, da je bil vzorec tumorja pridobljen med prvim kirurškim posegom, medtem ko „M2“ pomeni drugi neodvisno ustvarjeni in vitro model, pridobljen iz istega primarnega tumorja. Celična linija je bila razvita v okviru platforme HROG (Hansestadt Rostock Glioma), ki se osredotoča na ustvarjanje gliomskih kultur z izredno nizkim številom prehodov, ki ohranjajo biološke in molekularne lastnosti originalnega tumorja pacienta.

HROG06 T0 M2 raste v standardiziranih pogojih kulture in kaže vretenasto, fibroblastom podobno morfologijo, značilno za primarne kulture GBM. Imunofenotipske analize v seriji HROG kažejo izražanje markerjev nevralne in glialne linije, kot so glialni fibrilni kisli protein (GFAP), nestin in vimentin, kar podpira astrocitni izvor tumorja. Molekularna karakterizacija znotraj platforme HROG vključuje oceno klinično relevantnih biomarkerjev, kot so status metilacije promotorja MGMT, amplifikacija EGFR in mutacijski profil genov, vključno s TP53, IDH1/2, KRAS in BRAF, kar potrjuje ohranitev genomskih sprememb, povezanih s tumorjem, v kulturah zgodnjih pasov.

HROG06 T0 M2 se je uporabljal za in vitro oceno terapevtskih odzivov na standardna zdravljenja glioblastoma, vključno z alkilirajočimi kemoterapevtskimi sredstvi in ciljnimi zaviralci. Primerjalne analize znotraj zbirke HROG kažejo stabilno morfologijo, reproduktibilno kinetično rast in dosledne profile občutljivosti na zdravila v zgodnjih pasah, kar podpira njegovo primernost kot translacijski raziskovalni model. Kot celična linija GBM z nizkim številom pasov, pridobljena iz pacienta, HROG06 T0 M2 zagotavlja klinično relevantno platformo za preučevanje biologije glioblastoma, heterogenosti tumorja in mehanizmov odpornosti na zdravljenje.

Tkivo
Možgani
Bolezen
Glioblastom

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Identifikatorji

Navajanje vira
HROG06 T0 M2 (kataloška številka Cytion 300883)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FP

04Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukoze, w: 2,5 mM L-glutamina, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natrijevega piruvata, w: 1,2 g/L NaHCO3 (številka izdelka Cytion 820400a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo 50 % osnovno gojišče + 40 % FBS + 10 % DMSO ali CM-1 (kataloška številka Cytion 800100), ki vsebuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, ki ga povzroča krio.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

06Donator

Etnična pripadnost
Kavkaški