Mine otse sisu juurde
HROG06 T0 M2
Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom

Dokumendid

HROG06 T0 M2

Cell line · Toote number 300883

HROG06 T0 M2 on primaarne inimese glioblastoma multiforme’i (GBM) rakuliin, mis on loodud täiskasvanud patsiendi värskelt eemaldatud kasvajakoest, kellel diagnoositi ...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HROG06 T0 M2 on primaarne inimese glioblastoma multiforme (GBM) rakuliin, mis on loodud WHO IV astme glioblastoma diagnoosiga täiskasvanud patsiendi värskelt resektsioonitud kasvajakoest. Tähis „T0” näitab, et kasvaja proov võeti esialgse kirurgilise sekkumise käigus, samas kui „M2” viitab teisele iseseisvalt loodud in vitro mudelile, mis on saadud samast esmasest kasvajast. Rakuliin arendati HROG (Hansestadt Rostock Glioma) platvormi raames, mis keskendub ultra-madala passaažiga glioomikultuuride loomisele, mis säilitavad patsiendi algse kasvaja bioloogilised ja molekulaarsed omadused.

HROG06 T0 M2 kasvab standardiseeritud kultiveerimistingimustes adhesiivselt ja näitab esmasele GBM-kultuurile tüüpilist spindlikujulist, fibroblastidele sarnast morfoloogiat. HROG-seeria immunofenotüübilised analüüsid näitavad närvi- ja gliaalsete markerite, nagu gliaalsete fibrillaarse happelise valgu (GFAP), nestini ja vimentiini ekspressiooni, mis toetab astrotsütaarse kasvaja päritolu. HROG platvormi molekulaarne iseloomustus hõlmab kliiniliselt oluliste biomarkereid, nagu MGMT promootori metülatsioonistaatus, EGFR amplifikatsioon ja geenide mutatsiooniprofiil, sealhulgas TP53, IDH1/2, KRAS ja BRAF, mis kinnitab kasvajaga seotud genoomiliste muutuste säilimist varajastes kultuurides.

HROG06 T0 M2 on kasutatud in vitro hindamiseks ravivastustele glioblastoomi standardravile, sealhulgas alküülivate kemoteraapiliste ravimite ja sihtinhibiitorite puhul. HROG-kogumiku võrdlevad analüüsid näitavad stabiilset morfoloogiat, reprodutseeritavat kasvukineetikat ja järjepidevaid ravimite tundlikkuse profiile varastes passaažides, mis toetab selle sobivust translatsioonilise uurimismudelina. Patsiendilt saadud madala passaažiga GBM-rakuliinina pakub HROG06 T0 M2 kliiniliselt olulist platvormi glioblastoomi bioloogia, kasvaja heterogeensuse ja ravimresistentsuse mehhanismide uurimiseks.

Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Tunnused

Viide
HROG06 T0 M2 (Cytioni katalooginumber 300883)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FP

04Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüokonserveerimissöötmena kasutame 50% põhikeskkonda + 40% FBS + 10% DMSO ehk CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüoostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

06Annetaja

Etniline kuuluvus
Kaukaasia