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HROG06 T0 M2
Tessuto
Cervello
Malattia
Glioblastoma

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HROG06 T0 M2

Cell line · Codice prodotto 300883

HROG06 T0 M2 è una linea cellulare primaria di glioblastoma multiforme (GBM) umano ottenuta da tessuto tumorale appena asportato da un paziente adulto a cui era stata diagnosticata una ...

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01Informazioni generali

Descrizione

HROG06 T0 M2 è una linea cellulare primaria di glioblastoma multiforme (GBM) umano ottenuta da tessuto tumorale appena asportato da un paziente adulto con diagnosi di glioblastoma di grado IV secondo la classificazione WHO. La designazione "T0" indica che il campione tumorale è stato ottenuto durante l'intervento chirurgico iniziale, mentre "M2" si riferisce al secondo modello in vitro generato in modo indipendente e derivato dallo stesso tumore primario. La linea cellulare è stata sviluppata all'interno della piattaforma HROG (Hansestadt Rostock Glioma), che si concentra sulla generazione di colture di glioma a passaggi ultra-bassi che preservano le caratteristiche biologiche e molecolari del tumore originale del paziente.

HROG06 T0 M2 cresce in modo aderente in condizioni di coltura standardizzate e presenta una morfologia fusiforme, simile a quella dei fibroblasti, tipica delle colture primarie di GBM. Le analisi immunofenotipiche della serie HROG dimostrano l'espressione di marcatori della linea neurale e gliale come la proteina acida fibrillare gliale (GFAP), la nestina e la vimentina, a sostegno dell'origine astrocitica del tumore. La caratterizzazione molecolare all'interno della piattaforma HROG include la valutazione di biomarcatori clinicamente rilevanti come lo stato di metilazione del promotore MGMT, l'amplificazione dell'EGFR e il profilo mutazionale di geni quali TP53, IDH1/2, KRAS e BRAF, confermando la conservazione delle alterazioni genomiche associate al tumore nelle colture a passaggio precoce.

HROG06 T0 M2 è stato utilizzato per la valutazione in vitro delle risposte terapeutiche ai trattamenti standard per il glioblastoma, compresi gli agenti chemioterapici alchilanti e gli inibitori mirati. Le analisi comparative all'interno della collezione HROG indicano una morfologia stabile, cinetica di crescita riproducibile e profili di sensibilità ai farmaci coerenti nei primi passaggi, a sostegno della sua idoneità come modello di ricerca traslazionale. In quanto linea cellulare GBM a basso passaggio derivata da pazienti, HROG06 T0 M2 fornisce una piattaforma clinicamente rilevante per lo studio della biologia del glioblastoma, dell'eterogeneità tumorale e dei meccanismi di resistenza al trattamento.

Tessuto
Cervello
Malattia
Glioblastoma

02Classificazione

Organismo
Umano
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Identificatori

Riferimento bibliografico
HROG06 T0 M2 (numero di catalogo Cytion 300883)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FP

04Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo 50% di terreno basale + 40% di FBS + 10% di DMSO, o CM-1 (Cytion numero di catalogo 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crioindotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

06Donatore

Etnia
Caucasico