Přejít na obsah
HROG06 T0 M2
Tkáň
Mozek
Nemoc
Glioblastom

Dokumenty

HROG06 T0 M2

Cell line · Číslo výrobku 300883

HROG06 T0 M2 je primární lidská buněčná linie glioblastomu multiforme (GBM), získaná z čerstvě resekované nádorové tkáně dospělého pacienta, u kterého byla diagnostikována ...

€800.00bez DPH a poštovného
Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
1

01Obecné informace

Popis

HROG06 T0 M2 je primární lidská buněčná linie glioblastoma multiforme (GBM) vytvořená z čerstvě resekované nádorové tkáně dospělého pacienta s diagnózou glioblastomu stupně IV podle klasifikace WHO. Označení „T0“ znamená, že vzorek nádoru byl získán při počátečním chirurgickém zákroku, zatímco „M2“ odkazuje na druhý nezávisle vytvořený in vitro model odvozený ze stejného primárního nádoru. Buněčná linie byla vyvinuta v rámci platformy HROG (Hansestadt Rostock Glioma), která se zaměřuje na vytváření gliomových kultur s extrémně nízkým počtem pasáží, které zachovávají biologické a molekulární vlastnosti původního nádoru pacienta.

HROG06 T0 M2 roste adhezivně za standardizovaných kultivačních podmínek a vykazuje vřetenovitou morfologii podobnou fibroblastům, která je typická pro primární kultury GBM. Imunofenotypové analýzy v rámci série HROG prokazují expresi markerů nervové a gliové linie, jako je gliový fibrilární kyselý protein (GFAP), nestin a vimentin, což podporuje astrocytární původ nádoru. Molekulární charakterizace v rámci platformy HROG zahrnuje hodnocení klinicky relevantních biomarkerů, jako je stav metylace promotoru MGMT, amplifikace EGFR a mutační profilování genů včetně TP53, IDH1/2, KRAS a BRAF, což potvrzuje zachování genomových změn spojených s nádorem v kulturách s nízkým počtem pasáží.

HROG06 T0 M2 byl použit pro in vitro hodnocení terapeutických odpovědí na standardní léčbu glioblastomu, včetně alkylujících chemoterapeutických látek a cílených inhibitorů. Srovnávací analýzy v rámci kolekce HROG ukazují stabilní morfologii, reprodukovatelnou kinetiku růstu a konzistentní profily citlivosti na léky v raných pasážích, což podporuje jeho vhodnost jako translačního výzkumného modelu. Jako buněčná linie GBM odvozená od pacienta s nízkým počtem pasáží poskytuje HROG06 T0 M2 klinicky relevantní platformu pro studium biologie glioblastomu, heterogenity nádoru a mechanismů rezistence na léčbu.

Tkáň
Mozek
Nemoc
Glioblastom

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Identifikátory

Citace
HROG06 T0 M2 (katalogové číslo Cytion 300883)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FP

04Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-Glutaminu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme 50% základní médium + 40% FBS + 10% DMSO nebo CM-1 (katalogové číslo Cytion 800100), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu vyvolaného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

06Dárce

Etnická příslušnost
Kavkazský