Pāriet uz saturu
HROG06 T0 M2
Audums
Smadzenes
Slimība
Glioblastoma

Dokumenti

HROG06 T0 M2

Cell line · Preces numurs 300883

HROG06 T0 M2 ir primārā cilvēka daudzveidīgās glioblastomas (GBM) šūnu līnija, kas izveidota no svaigi izgriezta audzēja audiem pieaugušam pacientam, kuram diagnosticēta ...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HROG06 T0 M2 ir primārā cilvēka glioblastoma multiforme (GBM) šūnu līnija, kas izveidota no svaigi izgriezta audzēja audiem pieaugušam pacientam, kuram diagnosticēta IV pakāpes glioblastoma saskaņā ar PVO klasifikāciju. Apzīmējums „T0” norāda, ka audzēja paraugs tika iegūts sākotnējā ķirurģiskā iejaukšanās laikā, savukārt „M2” attiecas uz otro neatkarīgi izveidoto in vitro modeli, kas iegūts no tā paša primārā audzēja. Šūnu līnija tika izstrādāta HROG (Hansestadt Rostock Glioma) platformā, kas koncentrējas uz ultra-zemas pasāžas gliomas kultūru izveidi, kas saglabā sākotnējā pacienta audzēja bioloģiskās un molekulārās īpašības.

HROG06 T0 M2 aug piekļāvīgi standartizētos kultivēšanas apstākļos un uzrāda vārpstas formas, fibroblastveidīgu morfoloģiju, kas ir tipiska primārajām GBM kultūrām. Imunofenotipiskās analīzes visā HROG sērijā parāda neironu un glioblastu cilts marķieru, piemēram, glioblastu fibrilārā skābā proteīna (GFAP), nestīna un vimentīna, ekspresiju, kas apstiprina astrocitāro audzēja izcelsmi. Molekulārā raksturošana HROG platformā ietver klīniski nozīmīgu biomarķieru novērtēšanu, piemēram, MGMT promotora metilācijas statusu, EGFR amplifikāciju un gēnu mutāciju profilēšanu, tostarp TP53, IDH1/2, KRAS un BRAF, apstiprinot audzējiem saistītu genomisko izmaiņu saglabāšanu agrīnās pasāžas kultūrās.

HROG06 T0 M2 ir izmantots in vitro novērtējumam par terapeitisko reakciju uz standarta glioblastomas ārstēšanu, tostarp alkilējošiem ķīmijterapijas līdzekļiem, kā arī mērķtiecīgiem inhibitoriem. Salīdzinošās analīzes HROG kolekcijā liecina par stabilu morfoloģiju, reproducējamu augšanas kinētiku un konsekventiem zāļu jutības profiliem agrīnās pasāžās, kas apstiprina tās piemērotību kā translacionāla pētījumu modeļa. Kā no pacientiem iegūta, zemas pasāžas GBM šūnu līnija, HROG06 T0 M2 nodrošina klīniski nozīmīgu platformu glioblastomas bioloģijas, audzēja heterogenitātes un ārstēšanas rezistences mehānismu pētīšanai.

Audums
Smadzenes
Slimība
Glioblastoma

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Identifikatori

Atsauce
HROG06 T0 M2 (Cytion kataloga numurs 300883)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FP

04Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam 50 % bāzes barotni + 40 % FBS + 10 % DMSO vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu reģenerāciju un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

06Ziedotājs

Etniskā piederība
Kaukāzietis