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LN229
Gewebe
Gehirn, rechter frontaler parieto-okzipitaler Kortex
Krankheit
Glioblastom
Synonyme
LN 229, LN229, LNT-229

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LN229

Cell line · Artikelnummer 305043

LN229 is a human glioblastoma cell line derived from a 60-year-old White female patient with glioblastoma multiforme (GBM), specifically from the right fr...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

LN229 ist eine humane Glioblastom-Zelllinie, die von einer 60-jährigen weißen Patientin mit Glioblastoma multiforme (GBM), insbesondere aus dem rechten frontalen parieto-okzipitalen Kortex, stammt. Das Glioblastom ist eine der aggressivsten und tödlichsten Formen von Hirnkrebs, und LN229-Zellen werden in der Forschung intensiv genutzt, um die molekularen Grundlagen der Krankheit zu verstehen und potenzielle therapeutische Strategien zu entwickeln. Die Zellen weisen eine epithelähnliche Morphologie und adhärente Wachstumseigenschaften auf, was sie ideal für In-vitro-Studien macht. Aufgrund ihres hohen tumorerzeugenden Potenzials bilden sie bei der Injektion in Nacktmäuse leicht Tumore, was sie zu einem robusten Modell für die Krebsforschung macht.

Eines der entscheidenden Merkmale der LN229-Zellen ist das Vorhandensein eines mutierten p53-Gens (TP53) mit einer spezifischen CCT (Pro)-zu-CTT (Leu)-Mutation am Codon 98. Diese Mutation trägt wesentlich zum aggressiven Verhalten und zur Apoptoseresistenz der Zelllinie bei. Darüber hinaus haben LN229-Zellen ein Wildtyp-PTEN-Gen, aber sie weisen homozygote Deletionen in den Tumorsuppressorgenen p16 und p14ARF auf, die den Zellzyklus und die Apoptose entscheidend regulieren. Diese genetischen Veränderungen machen LN229 zu einem wertvollen Modell für die Untersuchung der Auswirkungen dieser Mutationen auf die Tumorbiologie und die Therapieresistenz.

LN229-Zellen sind besonders nützlich für Apoptose-Studien. Nach Stimulation mit Fas-Ligand werden sie apoptotisch, wobei der Zelltod innerhalb von 16 Stunden eintritt. Interessanterweise kann die Expression von Bcl-2 die LN229-Zellen zwar vor der durch den Fas-Liganden ausgelösten Apoptose schützen, sie bietet jedoch nur einen begrenzten Schutz vor der durch den Proteinsynthesehemmer Puromycin ausgelösten Apoptose. Dieses selektive Resistenzmuster macht die LN229-Zellen zu einem wichtigen Modell für das Verständnis der molekularen Mechanismen der Apoptose beim Glioblastom und für die Prüfung potenzieller apoptosemodulierender Therapien. Wie alle In-vitro-Forschungsmodelle sind auch die LN229-Zellen nicht für therapeutische oder In-vivo-Anwendungen geeignet.

Gewebe
Gehirn, rechter frontaler parieto-okzipitaler Kortex
Krankheit
Glioblastom
Synonyme
  • LN 229
  • LN229
  • LNT-229

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelial
Verdopplungszeit
31 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
LN229 (Cytion-Katalognummer 305043)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0393

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
60 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Europäisch