Mine otse sisu juurde
A9
Kude
Nahaalune sidekoe, lahtine sidekoe ja rasvkude, normaalne
Sünonüümid
A-9, A9 (Hamprecht), A9(Hamprecht), AG 9, GM00346, GM-346, GM346, GM00346B

Dokumendid

A9

Cell line · Toote number 305166

A9 cells are a fibroblast-like cell line derived from mouse adipose tissue. They were established as a subclone of the L929 parent strain by W. R. Earle i...

€550.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

A9 rakud on hiirte rasvkoest saadud fibroblastilaadne rakuliin. Need loodi 1940. aastal W. R. Earle'i poolt L929 vanemtüve alamkloonina. Emane tüvi saadi isase C3H/An hiire normaalsest nahaalusest areolaar- ja rasvkoest.

Nende rakkude märkimisväärne omadus on, et nad ekspresseerivad adenosiinfosforibosüültransferaasi (APRT) ja hüpoksantiinfosforibosüültransferaasi (HPRT), mida tähistatakse kui APRT+ ja HPRT+. Need rakud on olnud väärtuslikud viirusuuringutes, eelkõige pseudorabieesi viiruse (PRV), Indiana tüve vesikulaarse stomatiidi viiruse (VSV) ja herpes simplex'i viiruse (HSV) puhul.

A9 rakkude tundlikkus ja reaktsioon nendele viirustele on muutnud need kasulikuks viiruse replikatsiooni, patogeneesi ja võimaliku viirusevastase ravi uurimiseks. Immunoloogias kasutatakse A9 rakke erinevates uurimisvaldkondades. Nad on väärtuslik mudel immuunvastuse, antikehade tootmise, monoklonaalsete antikehade tootmise ja hübriidtehnoloogia uurimiseks.

Tänu nende kiirele paljunemisele (kahekordistumisaeg umbes 24 tundi) pakuvad A9 rakud piisavalt rakke katsete ja järgnevate rakenduste jaoks. A9 rakkudel on fibroblastide sarnane morfoloogia ja nad kleepuvad kultuurisubstraadi külge. A9 rakud, mis liigitatakse loomseteks rakkudeks ja kuuluvad hübriidoomi rakutüüpi, on moodustatud Mus musculus'e (hiir) B-lümfotsüütide ja sama liigi müeloomirakkude liitmisel.

See ainulaadne kombinatsioon võimaldab A9 rakkudel omada nii B-lümfotsüütide kui ka müeloomirakkude omadusi. Üldiselt on A9 rakud hästi tuntud fibroblastilaadne rakuliin, mida kasutatakse viirusinfektsioonide, eriti PRV, VSV ja HSV, uurimiseks ja immunoloogias.

Kude
Nahaalune sidekoe, lahtine sidekoe ja rasvkude, normaalne
Sünonüümid
  • A-9
  • A9 (Hamprecht)
  • A9(Hamprecht)
  • AG 9
  • GM00346
  • GM-346
  • GM346
  • GM00346B

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Fibroblastilaadsed
Tuumorigeenne
Jah, alasti hiirtel.

04Tunnused

Viide
A9 (Cytioni katalooginumber 305166)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_3984

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Antigeeni ekspressioon
H-2k

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
C3H/An
Doonori vanus
100 päeva