Preskoči na vsebino
A9
Tkivo
Podkožno vezivno tkivo, ohlapno vezivno tkivo in maščoba, normalno
Sinonimi
A-9, A9 (Hamprecht), A9(Hamprecht), AG 9, GM00346, GM-346, GM346, GM00346B

Dokumenti

A9

Cell line · Številka izdelka 305166

A9 cells are a fibroblast-like cell line derived from mouse adipose tissue. They were established as a subclone of the L929 parent strain by W. R. Earle i...

€550.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celice A9 so fibroblastom podobne celične linije, pridobljene iz mišjega maščobnega tkiva. Leta 1940 jih je W. R. Earle ustvaril kot podklon starševskega seva L929. Starševski sev je bil pridobljen iz normalnega podkožnega areolarnega in maščobnega tkiva samcev miši C3H/An.

Pomembna značilnost teh celic je, da izražajo adenozin fosforibosil transferazo (APRT) in hipoksantin fosforibosil transferazo (HPRT), označeni kot APRT+ in HPRT+. Te celice so bile dragocene pri študijah virusov, zlasti virusa psevdorabiesa (PRV), virusa vezikularnega stomatitisa (VSV) seva Indiana in virusa herpes simplex (HSV).

Občutljivost in odzivnost celic A9 na te viruse sta jih naredila uporabne za preučevanje virusne replikacije, patogeneze in možnih protivirusnih zdravljenj. V imunologiji se celice A9 uporabljajo na različnih raziskovalnih področjih. So dragocen model za preučevanje imunskih odzivov, proizvodnje protiteles, proizvodnje monoklonskih protiteles in tehnologije hibridomov.

Zaradi hitre proliferacije (podvojitveni čas je približno 24 ur) celice A9 zagotavljajo zadostno zalogo celic za poskuse in nadaljnje aplikacije. Celice A9 imajo fibroblastom podobno morfologijo in se prilepijo na podlago za gojenje. Celice A9, ki jih uvrščamo med živalske celice in spadajo med hibridomske celice, so nastale z združitvijo limfocitov B miši Mus musculus (miš) z mielomskimi celicami iste vrste.

Ta edinstvena kombinacija omogoča, da imajo celice A9 lastnosti limfocitov B in mielomskih celic. Na splošno so celice A9 dobro uveljavljena fibroblastom podobna celična linija, ki se uporablja za preučevanje virusnih okužb, zlasti PRV, VSV in HSV, ter v imunologiji.

Tkivo
Podkožno vezivno tkivo, ohlapno vezivno tkivo in maščoba, normalno
Sinonimi
  • A-9
  • A9 (Hamprecht)
  • A9(Hamprecht)
  • AG 9
  • GM00346
  • GM-346
  • GM346
  • GM00346B

02Razvrstitev

Organizem
Miška
Seks
Moški
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Fibroblastom podobni
Tumorigeničen
Da, na golih miših.

04Identifikatorji

Navajanje vira
A9 (kataloška številka Cytion 305166)
Davčna identifikacijska številka NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_3984

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija antigena
H-2k

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Pasma / podvrsta
C3H/An
Starost darovalca
100 dni