Siirry sisältöön
A9
Kudos
Ihonalainen sidekudos, löysä sidekudos ja rasva, normaali
Synonyymit
A-9, A9 (Hamprecht), A9(Hamprecht), AG 9, GM00346, GM-346, GM346, GM00346B

Asiakirjat

A9

Cell line · Tuotenumero 305166

A9 cells are a fibroblast-like cell line derived from mouse adipose tissue. They were established as a subclone of the L929 parent strain by W. R. Earle i...

€550.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

A9-solut ovat hiiren rasvakudoksesta peräisin oleva fibroblastien kaltainen solulinja. W. R. Earle perusti ne L929-alkukannan alaklooniksi vuonna 1940. Emokanta saatiin urospuolisen C3H/An-hiiren normaalista ihonalaisesta areolaarisesta ja rasvakudoksesta.

Näiden solujen huomattava ominaisuus on, että ne ilmentävät adenosiinifosforibosyylitransferaasia (APRT) ja hypoksantiinifosforibosyylitransferaasia (HPRT), joita kutsutaan nimillä APRT+ ja HPRT+. Nämä solut ovat olleet arvokkaita virustutkimuksissa, joissa on käytetty erityisesti pseudorabies-virusta (PRV), Indiana-kannan vesicular stomatitis -virusta (VSV) ja herpes simplex -virusta (HSV).

A9-solujen herkkyys ja vaste näille viruksille on tehnyt niistä hyödyllisiä virusten replikaation, patogeneesin ja mahdollisten viruslääkkeiden tutkimisessa. Immunologiassa A9-soluja käytetään useilla tutkimusalueilla. Ne ovat arvokas malli immuunivasteiden, vasta-ainetuotannon, monoklonaalisten vasta-aineiden tuottamisen ja hybridoomateknologian tutkimiseen.

Koska A9-solut lisääntyvät nopeasti (kaksinkertaistumisaika on noin 24 tuntia), ne tarjoavat riittävän soluvarannon kokeita ja jatkokäyttöä varten. A9-soluilla on fibroblastien kaltainen morfologia ja ne tarttuvat viljelyalustaan. Eläinsoluiksi luokitellut ja hybridoomasolutyyppiin kuuluvat A9-solut on muodostettu fuusioimalla Mus musculus -lajin (hiiri) B-lymfosyyttejä ja saman lajin myeloomasoluja.

Tämän ainutlaatuisen yhdistelmän ansiosta A9-soluilla on sekä B-lymfosyyttien että myeloomasolujen ominaisuuksia. Kaiken kaikkiaan A9-solut ovat vakiintunut fibroblastien kaltainen solulinja, jota käytetään virusinfektioiden, erityisesti PRV:n, VSV:n ja HSV:n, tutkimiseen ja immunologiaan.

Kudos
Ihonalainen sidekudos, löysä sidekudos ja rasva, normaali
Synonyymit
  • A-9
  • A9 (Hamprecht)
  • A9(Hamprecht)
  • AG 9
  • GM00346
  • GM-346
  • GM346
  • GM00346B

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Fibroblastien kaltaiset
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä.

04Tunnisteet

Lähdeviite
A9 (Cytion-tuotenumero 305166)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_3984

05Ilmentyminen ja alttius

Antigeenin ilmentyminen
H-2k

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Rotua / alalajia
C3H/An
Luovuttajan ikä
100 päivää