Aller directement au contenu
SVI
Tissu
Rein

Documents

SVI

Cell line · Référence du produit 400495

La lignée cellulaire SVI a été clonée à partir de la prolifération de glomérules isolés chez des souris transgéniques H-2kb-tsA58. Ces souris sont porteuses d'un gène sensible à la température...

€800.00hors taxes et frais de port

Personnalisation / Recommandations

En stock
Lot
Recommandé (lot le plus récent)
1

01Informations générales

Description
La lignée cellulaire SVI a été clonée à partir de l'excroissance de glomérules isolés chez des souris transgéniques H-2kb-tsA58. Ces souris sont porteuses d'une variante thermosensible de l'antigène SV40 large T sous le contrôle du promoteur H-2kb inductible par l'IFN. Les cellules prolifèrent à 33 degrés Celsius et se différencient à 37 degrés Celsius. À l'heure actuelle, les cellules ont été cultivées avec succès pendant plus de 40 passages sans qu'aucun changement phénotypique n'ait été observé. Les SVI sont très similaires aux E11 en termes de morphologie et d'expression de plusieurs marqueurs. Par exemple, la podocine et le WT1 sont exprimés dans une moindre mesure par rapport à l'E11. Différenciation : Commencer le processus de différenciation en plaçant le(s) flacon(s) non confluent(s) dans un incubateur à 38 degrés Celsius / 5% CO2 pendant un minimum de 14 jours pour compléter la différenciation. L'ajout d'interféron-gamma (INF-gamma) n'est pas nécessaire.
Tissu
Rein

02Classification

Organisme
Souris
Sexe
Non précisé
Propriétés de croissance
Adepte
Statut OGM
GMO-S1
Informations détaillées sur le statut OGM
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Type de cellule
Podocyte

04Identifiants

Référence
SVI (numéro de catalogue Cytion 400495)
Numéro d'identification fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Expression et sensibilité

Expression des protéines
WT1, Lmx1b, néphrine, NEPHI, FAT, P-cadhérine, CD2AP, ZO-I, podocalyxine, podoplanine, synpo, podocine, TRPC6 et GAPDH.

06Manipulation et culture

Milieu de culture
RPMI 1640, w : 2.0 mM Glutamine stable, w : 2.0 g/L NaHCO3 (numéro d'article Cytion 820700a)
Atmosphère d'incubation

33°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10% de FBS
Réactif de dissociation
Accutase
Repiquage
Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
Densité de semis
Inoculer les flacons de culture cellulaire T75 avec 1x 104 cellules/cm2 (environ 60 000 cellules/ml, 12 ml de milieu dans un T75) pour le processus de prolifération. Maintenir les cellules à 33 °C / 5 % de CO2, jusqu'à ce que le flacon soit confluent à environ 75 %.
Renouvellement des fluides
3 fois par semaine
Décongélation et mise en culture

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

08Donateur

Race / sous-espèce
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Âge du donneur
Adulte