Langsung ke isi
SVI
Tisu
Ginjal

Dokumen

SVI

Cell line · Nomor produk 400495

Garis sel SVI telah dikloning dari pertumbuhan glomerulus yang diisolasi dari tikus transgenik H-2kb-tsA58. Tikus-tikus tersebut membawa gen yang sensitif terhadap suhu...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim

Penyesuaian / Rekomendasi

Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
1

01Informasi umum

Deskripsi
Garis sel SVI telah dikloning dari pertumbuhan glomeruli yang diisolasi dari tikus transgenik H-2kb-tsA58. Tikus-tikus tersebut membawa varian yang peka terhadap suhu dari antigen T besar SV40 yang berada di bawah kendali promotor H-2kb yang dapat diinduksi IFN-g. Sel berkembang biak pada suhu 33 derajat Celcius, dan berdiferensiasi pada suhu 37 derajat Celcius. Saat ini, sel telah berhasil dikultur selama lebih dari 40 kali tanpa mencatat perubahan fenotipik. SVI sangat mirip dengan E11 dalam hal morfologi dan ekspresi beberapa penanda. Misalnya, podocin dan WT1 diekspresikan pada tingkat yang lebih rendah dibandingkan dengan E11. Diferensiasi: Mulailah proses diferensiasi dengan menempatkan labu yang tidak mengalir ke dalam inkubator pada suhu 38 derajat Celcius / 5% CO2 selama minimal 14 hari untuk menyelesaikan diferensiasi. Penambahan interferon-gamma (INF-gamma) tidak diperlukan.
Tisu
Ginjal

02Klasifikasi

Organisme
Tikus
Seks
Tidak ditentukan
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Status GMO
GMO-S1
Rincian status GMO
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Jenis sel
Podocyte

04Pengidentifikasi

Referensi
SVI (nomor katalog Cytion 400495)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Ekspresi dan kerentanan

Ekspresi protein
WT1, Lmx1b, nephrin, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6, dan GAPDH.

06Penanganan dan budidaya

Media kultur
RPMI 1640, w: 2,0 mM Glutamin stabil, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Nomor artikel Cytion 820700a)
Suasana inkubasi

33°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS
Reagen disosiasi
Accutase
Perbanyakan sel
Buang media lama dari sel yang melekat dan cuci dengan PBS yang tidak mengandung kalsium dan magnesium. Untuk labu T25, gunakan 3-5 ml PBS, dan untuk labu T75, gunakan 5-10 ml. Kemudian, tutupi sel sepenuhnya dengan Accutase, menggunakan 1-2 ml untuk labu T25 dan 2,5 ml untuk labu T75. Biarkan sel diinkubasi pada suhu kamar selama 8-10 menit untuk melepaskannya. Setelah inkubasi, campurkan sel secara perlahan dengan 10 ml medium untuk meresuspensi sel, kemudian sentrifugasi pada 300xg selama 3 menit. Buang supernatan, resuspensi sel dalam medium segar, dan pindahkan ke dalam labu baru yang sudah berisi medium segar.
Kepadatan penanaman
Inokulasikan flask kultur sel T75 dengan 1x 10⁴ sel/cm² (sekitar 60.000 sel/ml, 12 ml medium dalam satu flask T75) untuk proses proliferasi. Jaga sel pada suhu 33 derajat Celsius / 5% CO₂, hingga flask mencapai sekitar 75% konfluen.
Pergantian cairan
3 kali per minggu
Pencairan dan pembiakan

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap (termasuk FBS) + 10% DMSO untuk viabilitas pasca-pencairan yang memadai, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

08Donatur

Jenis / subspesies
(CBA/Ca x C57BL/10) Tg (H2KbtsA58) Immort
Usia donor
Dewasa