Přejít na obsah
SVI
Tkáň
Ledviny

Dokumenty

SVI

Cell line · Číslo výrobku 400495

Buněčná linie SVI byla klonována z výrůstků glomerulů, které byly izolovány z transgenních myší H-2kb-tsA58. Tyto myši jsou nositeli teplotně citlivého...

€800.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
1

01Obecné informace

Popis
Buněčná linie SVI byla naklonována z výrůstků glomerulů, které byly izolovány z transgenních myší H-2kb-tsA58. Tyto myši nesou teplotně citlivou variantu velkého T antigenu SV40 pod kontrolou promotoru H-2kb indukovaného IFN-g. Buňky se množí při teplotě 33 °C a diferencují se při teplotě 37 °C. V současné době byly buňky úspěšně kultivovány po více než 40 pasáží, aniž by byly zaznamenány fenotypové změny. SVI jsou velmi podobné E11, pokud jde o morfologii a expresi několika markerů. Například podocin a WT1 jsou ve srovnání s E11 exprimovány v menší míře. Diferenciace: Diferenciační proces zahájíte umístěním nekonfluentní baňky (baněk) do inkubátoru při teplotě 38 °C / 5 % CO2 na dobu minimálně 14 dní, aby byla diferenciace dokončena. Přidání interferonu gama (INF-gamma) není nutné.
Tkáň
Ledviny

02Klasifikace

Organismus
Myš
Sex
Nespecifikováno
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GMO
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Typ buňky
Podocyty

04Identifikátory

Citace
SVI (katalogové číslo Cytion 400495)
Daňové identifikační číslo NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Exprese a náchylnost

Exprese proteinů
WT1, Lmx1b, nefrin, NEPHI, FAT, P-kadherin, CD2AP, ZO-I, podokalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 a GAPDH.

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilní glutamin, w: 2,0 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820700a)
Inkubační atmosféra

33 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Hustota výsevu
Naočkujte kultivační lahve T75 1x 104 buňkami/cm2 (přibližně 60 000 buněk/ml, 12 ml média v jedné lahvi T75) pro proces proliferace. Udržujte buňky při teplotě 33 °C / 5 % CO2, dokud není lahev asi z 75 % konfluentní.
Obnova tekutin
3krát týdně
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Plemeno / poddruh
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Věk dárce
Dospělí