Ga naar de inhoud
SVI
Weefsel
Nieren

Documenten

SVI

Cell line · Productnummer 400495

De SVI-cellijn is gekloond uit de uitgroei van glomeruli die waren geïsoleerd uit H-2kb-tsA58 transgene muizen. De muizen dragen een temperatuurgevoelige...

€800.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
1

01Algemene informatie

Beschrijving
De SVI-cellijn is gekloond uit de uitgroei van glomeruli die geïsoleerd zijn uit H-2kb-tsA58 transgene muizen. De muizen dragen een temperatuurgevoelige variant van het SV40 groot T-antigeen onder controle van de IFN-g-induceerbare H-2kb-promotor. De cellen prolifereren bij 33 graden Celsius en differentiëren bij 37 graden Celsius. Op dit moment zijn de cellen met succes gekweekt voor meer dan 40 passages zonder fenotypische veranderingen. SVI lijken sterk op E11 wat betreft morfologie en expressie van verschillende markers. Podocine en WT1 komen bijvoorbeeld in mindere mate tot expressie dan bij E11. Differentiatie: Start het differentiatieproces door de niet-confluente erlenmeyers gedurende minimaal 14 dagen in een incubator bij 38 graden Celsius / 5% CO2 te plaatsen om de differentiatie te voltooien. Toevoeging van interferongamma (INF-gamma) is niet nodig.
Weefsel
Nieren

02Classificatie

Organisme
Muis
Seks
Niet gespecificeerd
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Celtype
Podocyten

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
SVI (Cytion catalogusnummer 400495)
NCBI-belastingnummer
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
WT1, Lmx1b, nephrin, NEPHI, FAT, P-cadherine, CD2AP, ZO-I, podocalyxine, podoplanine, synpo, podocine, TRPC6 en GAPDH.

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiele Glutamine, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Incubatieomgeving

33°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
Inoculeer T75-celkweekflessen met 1x 104 cellen/cm2 (ongeveer 60.000 cellen/ml, 12 ml medium in één T75) voor het proliferatieproces. Bewaar de cellen bij 33 graden Celsius / 5% CO2, totdat de fles voor ongeveer 75% confluent is.
Vloeistofverversing
3 keer per week
Ontdooien en kweken

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Soort / ondersoort
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Leeftijd van de donor
Volwassen