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SVI
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SVI

Cell line · Codice prodotto 400495

La linea cellulare SVI è stata clonata a partire dalla proliferazione di glomeruli isolati da topi transgenici H-2kb-tsA58. I topi sono portatori di un gene sensibile alla temperatura...

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1

01Informazioni generali

Descrizione
La linea cellulare SVI è stata clonata dall'escrescenza di glomeruli isolati da topi transgenici H-2kb-tsA58. Questi topi sono portatori di una variante sensibile alla temperatura dell'antigene SV40 large T, sotto il controllo del promotore H-2kb, inducibile dall'IFN. Le cellule proliferano a 33 gradi Celsius e si differenziano a 37 gradi Celsius. Attualmente, le cellule sono state coltivate con successo per più di 40 passaggi senza notare cambiamenti fenotipici. Le SVI sono molto simili alle E11 in termini di morfologia e di espressione di diversi marcatori. Ad esempio, la podocina e il WT1 sono espressi in misura minore rispetto all'E11. Differenziamento: Iniziare il processo di differenziazione ponendo le fiaschette non confluenti in un incubatore a 38 gradi Celsius / 5% CO2 per un minimo di 14 giorni per completare la differenziazione. L'aggiunta di interferone-gamma (INF-gamma) non è necessaria.
Tessuto
Rene

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Non specificato
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tipo di cellula
Podocita

04Identificatori

Riferimento bibliografico
SVI (numero di catalogo Cytion 400495)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
WT1, Lmx1b, nefrina, NEPHI, FAT, P-caderina, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanina, synpo, podocin, TRPC6 e GAPDH.

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

33°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Inoculare le fiasche di coltura cellulare T75 con 1x 104 cellule/cm2 (circa 60.000 cellule/ml, 12 ml di terreno in una T75) per il processo di proliferazione. Mantenere le cellule a 33 °C / 5% di CO2, fino a quando la fiasca non raggiunge una confluenza del 75% circa.
Rinnovo dei fluidi
3 volte a settimana
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Età dei donatori
Adulti