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Cell line · Número do produto 400495

A linha celular SVI foi clonada a partir do crescimento de glomérulos isolados de ratos transgénicos H-2kb-tsA58. Os ratos são portadores de um gene sensível à temperatura...

€800.00sem impostos nem portes de envio

Personalização / Recomendações

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1

01Informações gerais

Descrição
A linha celular SVI foi clonada a partir do crescimento de glomérulos que foram isolados de ratinhos transgénicos H-2kb-tsA58. Os ratinhos transportam uma variante sensível à temperatura do antigénio SV40 large T sob controlo do promotor H-2kb induzido por IFN-g. As células proliferam a 33 graus Celsius e diferenciam-se a 37 graus Celsius. Atualmente, as células têm sido cultivadas com sucesso durante mais de 40 passagens sem se observarem alterações fenotípicas. As SVI são muito semelhantes às E11 em termos de morfologia e expressão de vários marcadores. Por exemplo, a podocina e o WT1 são expressos em menor grau em comparação com o E11. Diferenciação: Iniciar o processo de diferenciação colocando o(s) frasco(s) não confluente(s) numa incubadora a 38 graus Celsius / 5% CO2 durante um mínimo de 14 dias para completar a diferenciação. Não é necessária a adição de interferão-gama (INF-gama).
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02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Não especificado
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Tipo de célula
Podocitos

04Identificadores

Referência
SVI (número de catálogo Cytion 400495)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
WT1, Lmx1b, nefrina, NEPHI, FAT, P-caderina, CD2AP, ZO-I, podocalyxina, podoplanina, synpo, podocina, TRPC6 e GAPDH.

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

33°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
Inocule frascos de cultura celular T75 com 1x 104 células/cm² (cerca de 60.000 células/ml, 12 ml de meio em um T75) para o processo de proliferação. Mantenha as células a 33 graus Celsius / 5% de CO₂, até que o frasco esteja cerca de 75% confluente.
Renovação de fluidos
3 vezes por semana
Descongelamento e cultura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Idade do dador
Adulto