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SVI
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腎臓

SVI

Cell line · 製品番号 400495

SVI細胞株は、H-2kb-tsA58トランスジェニックマウスから単離した糸球体の増殖物からクローン化されたものである。このマウスは、温度感受性...

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01概要

説明
SVI細胞株は、H-2kb-tsA58トランスジェニックマウスから単離された糸球体のアウトグロースからクローニングされた。このマウスは、IFN-g誘導性のH-2kbプロモーターの制御下にあるSV40ラージT抗原の温度感受性変異体を保有している。細胞は33℃で増殖し、37℃で分化する。現在、この細胞は40回以上の継代培養に成功しているが、表現型の変化は見られない。SVIは、形態やいくつかのマーカーの発現の点で、E11に非常によく似ている。例えば、ポドシンやWT1の発現はE11に比べて少ない。分化:非コンフルエントのフラスコを38℃/5%CO2のインキュベーターに入れ、最低14日間培養して分化を完了させる。インターフェロン-γ(INF-γ)の添加は必要ない。
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腎臓

02分類

生物
マウス
セックス
未指定
成長特性
アドヘレント
GMOの有無
GMO-S1
GMOのステータスに関する詳細
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
バイオセーフティレベル
1

03特徴

細胞の種類
ポドサイト

04識別子

引用
SVI (Cytion カタログ番号 400495)
NCBI 納税者番号
10090
セロサウルス
CVCL_5943

05発現と感受性

タンパク質の発現
WT1、Lmx1b、ネフリン、NEPHI、FAT、P-カドヘリン、CD2AP、ZO-I、ポドカリキシン、ポドプラニン、シンポ、ポドシン、TRPC6、GAPDH。

06取り扱いと飼育

培地
RPMI1640、w:2.0mM安定グルタミン、w:2.0g/L NaHCO3(Cytion article number 820700a)
培養雰囲気

33℃、5%CO2、加湿雰囲気。

サプリメント
培地に10% FBSを加える
解離試薬
アキュターゼ
継代培養
接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウ ムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で8-10分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁し、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
播種密度
増殖プロセス用に、T75細胞培養フラスコに1×10⁴細胞/cm²(約60,000細胞/ml、T75フラスコ1本あたり培地12ml)を接種する。フラスコが約75%コンフルエントになるまで、細胞を33℃/5% CO₂条件下で維持する。
流体の更新
週3回
解凍と培養
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07品質管理と凍結保存

無菌性

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

凍結培地
凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地(FBSを含む)+10%DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1(Cytionカタログ番号800100)を使用している。
保管条件

長期保存の場合、バイアルを-150~-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

配送条件

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

08寄付者

品種/亜種
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
ドナーの年齢
アダルト