Skip to content
SVI
Tissue
כליה

Documents

SVI

Cell line · Product number 400495

The SVI cell line has been cloned from the outgrowth of glomeruli which were isolated from H-2kb-tsA58 transgenic mice. The mice carry a temperature-sensitiv...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description
קו התאים SVI שוכפל מתוצרי הגלומרולי שהופקו מעכברי H-2kb-tsA58 מהונדסים גנטית. העכברים נושאים וריאנט רגיש לטמפרטורה של האנטיגן T הגדול SV40, הנמצא תחת בקרה של הפרומוטור H-2kb המושרה על ידי IFN-g. התאים מתרבים בטמפרטורה של 33 מעלות צלזיוס, ומתמיינים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. נכון לעכשיו, התאים הודגרו בהצלחה במשך יותר מ-40 מעברים ללא שינויים פנוטיפיים. SVI דומים מאוד ל-E11 מבחינת המורפולוגיה והביטוי של מספר סמנים. לדוגמה, podocin ו-WT1 מבוטאים במידה פחותה בהשוואה ל-E11. התמיינות: התחל את תהליך ההתמיינות על ידי הצבת הבקבוקון/ים הלא-מלאים באינקובטור בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס / 5% CO2 למשך 14 ימים לפחות, עד להשלמת ההתמיינות. אין צורך להוסיף אינטרפרון-גאמא (INF-gamma).
Tissue
כליה

02Classification

Organism
Mouse
Sex
Unspecified
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Cell type
פודוציט

04Identifiers

Citation
SVI (מספר קטלוגי Cytion 400495)
NCBI TaxID
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Expression and susceptibility

Protein expression
WT1, Lmx1b, נפרין, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, פודוקסינקסין, פודופלנין, סינפו, פודוקין, TRPC6 ו-GAPDH.

06Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
Incubation atmosphere

33°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Seeding density
החדיר לתרבית תאים T75 בקבוקים עם 1x 104 תאים/סמ"ר (כ-60,000 תאים/מ"ל, 12 מ"ל מדיום בבקבוק T75 אחד) לצורך תהליך השגשוג. שמור את התאים בטמפרטורה של 33 מעלות צלזיוס / 5% CO2, עד שהבקבוק יהיה מלא בכ-75%.
Fluid renewal
3 פעמים בשבוע
Thawing and culturing

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Breed / subspecies
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Donor age
מבוגר