Gå direkte til indholdet
SVI
Væv
Nyre

Dokumenter

SVI

Cell line · Varenummer 400495

SVI-cellelinjen er klonet fra udvækst af glomeruli, der blev isoleret fra H-2kb-tsA58-transgene mus. Musene bærer et temperaturfølsomt...

€800.00ekskl. moms og fragt

Tilpasning / Anbefalinger

På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse
SVI-cellelinjen er blevet klonet fra udvæksten af glomeruli, som blev isoleret fra H-2kb-tsA58-transgene mus. Musene bærer en temperaturfølsom variant af SV40 large T-antigenet under kontrol af den IFN-g-inducerbare H-2kb-promotor. Cellerne formerer sig ved 33 grader Celsius, og de differentierer sig ved 37 grader Celsius. På nuværende tidspunkt er cellerne blevet dyrket med succes i mere end 40 passager uden at bemærke fænotypiske ændringer. SVI ligner meget E11 med hensyn til morfologi og udtrykket af flere markører. For eksempel udtrykkes podocin og WT1 i mindre grad sammenlignet med E11. Differentiering: Start differentieringsprocessen ved at placere de ikke-flydende kolber i en inkubator ved 38 grader Celsius / 5 % CO2 i mindst 14 dage for at fuldføre differentieringen. Tilsætning af interferon-gamma (INF-gamma) er ikke nødvendig.
Væv
Nyre

02Klassificering

Organisme
Mus
Køn
Uspecificeret
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Celletype
Podocyt

04Identifikatorer

Kildehenvisning
SVI (Cytion katalognummer 400495)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Udtryk og modtagelighed

Proteinekspression
WT1, Lmx1b, nephrin, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 og GAPDH.

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
RPMI 1640, m: 2,0 mM stabil glutamin, m: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosfære

33 °C, 5 %CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Såtæthed
Inokulér T75-cellekulturflasker med 1x 104 celler/cm2 (ca. 60.000 celler/ml, 12 ml medium i en T75) til proliferationsprocessen. Opbevar cellerne ved 33 °C / 5 % CO2, indtil flasken er ca. 75 % konfluent.
Væskeudskiftning
3 gange om ugen
Optøning og dyrkning

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Race / underart
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Donorens alder
Voksen