Skip to content
SVI
Tissue
ไต

Documents

SVI

Cell line · Product number 400495

The SVI cell line has been cloned from the outgrowth of glomeruli which were isolated from H-2kb-tsA58 transgenic mice. The mice carry a temperature-sensitiv...

€800.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description
เซลล์ไลน์ SVI ถูกโคลนมาจากส่วนที่เจริญเติบโตของกลomeruli ซึ่งถูกแยกออกมาจากหนูทดลองสายพันธุ์ H-2kb-tsA58 ที่มีการแทรกยีน SV40 large T antigen ชนิดไวต่ออุณหภูมิภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ IFN-g-inducible H-2kb เซลล์จะเจริญเติบโตที่อุณหภูมิ 33 องศาเซลเซียส และจะแยกตัวเป็นเซลล์ชนิดต่าง ๆ ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสปัจจุบัน เซลล์ได้รับการเพาะเลี้ยงสำเร็จแล้วมากกว่า 40 ครั้ง โดยไม่พบการเปลี่ยนแปลงทางฟีโนไทป์ SVI มีความคล้ายคลึงกับ E11 ในแง่ของรูปร่างและการแสดงออกของตัวบ่งชี้หลายชนิดตัวอย่างเช่น โปรโดซิน (podocin) และ WT1 ถูกแสดงออกในระดับที่น้อยกว่าเมื่อเทียบกับ E11 การแยกตัว: เริ่มกระบวนการแยกตัวโดยนำขวดเพาะเลี้ยงที่ไม่เต็ม (non-confluent flask) ไปไว้ในตู้เพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 38 องศาเซลเซียส / ความเข้มข้นของคาร์บอนไดออกไซด์ 5% เป็นเวลาอย่างน้อย 14 วันเพื่อให้การแยกตัวเสร็จสมบูรณ์ ไม่จำเป็นต้องเติมอินเตอร์เฟอรอน-แกมมา (INF-gamma)
Tissue
ไต

02Classification

Organism
Mouse
Sex
Unspecified
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Cell type
โพโดไซต์

04Identifiers

Citation
เอสวีไอ (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 400495)
NCBI TaxID
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Expression and susceptibility

Protein expression
WT1, Lmx1b, เนฟริน, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 และ GAPDH

06Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, w: 2.0 mM กลูตามีนเสถียร, w: 2.0 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820700a)
Incubation atmosphere

33°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Seeding density
ฉีดเชื้อเซลล์ลงในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ T75 ด้วยเซลล์จำนวน 1x 104 เซลล์/cm2 (ประมาณ 60,000 เซลล์/มล., 12 มล. ของอาหารเลี้ยงเซลล์ในหนึ่งขวด T75) สำหรับกระบวนการเพิ่มจำนวนเซลล์ เก็บเซลล์ไว้ที่อุณหภูมิ 33 องศาเซลเซียส / ความเข้มข้นของก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ 5% จนกว่าขวดจะมีความหนาแน่นประมาณ 75%
Fluid renewal
3 ครั้งต่อสัปดาห์
Thawing and culturing

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Breed / subspecies
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) อิมมอร์ท
Donor age
ผู้ใหญ่