Gå direkt till innehållet
SVI
Vävnad
Njurar

Dokument

SVI

Cell line · Produktnummer 400495

SVI-cellinjen har klonats från utväxter av glomeruli som isolerats från transgena H-2kb-tsA58-möss. Mössen bär på en temperaturkänslig...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Finns i lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
1

01Allmän information

Beskrivning
SVI-cellinjen har klonats från utväxten av glomeruli som isolerats från H-2kb-tsA58 transgena möss. Mössen bär på en temperaturkänslig variant av SV40 large T-antigenet under kontroll av den IFN-g-inducerbara H-2kb-promotorn. Cellerna prolifererar vid 33 grader Celsius och differentieras vid 37 grader Celsius. För närvarande har cellerna odlats framgångsrikt i mer än 40 passager utan att fenotypiska förändringar har noterats. SVI är mycket lika E11 när det gäller morfologi och uttryck av flera markörer. Exempelvis uttrycks podocin och WT1 i mindre utsträckning jämfört med E11. Differentiering: Starta differentieringsprocessen genom att placera de icke-flytande kolvarna i en inkubator vid 38 grader Celsius / 5% CO2 i minst 14 dagar för att slutföra differentieringen. Tillsats av interferon-gamma (INF-gamma) är inte nödvändig.
Vävnad
Njurar

02Klassificering

Organism
Mus
Kön
Ospecificerat
Tillväxtegenskaper
Följsam
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Celltyp
Podocyt

04Identifierare

Källa
SVI (Cytion katalognummer 400495)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Uttryck och mottaglighet

Proteinexpression
WT1, Lmx1b, nefrin, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 och GAPDH.

06Hantering och odling

Odlingsmedium
RPMI 1640, med: 2,0 mM stabilt glutamin, med: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosfär

33°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Såtäthet
Inokulera T75-cellodlingsflaskor med 1x 104 celler/cm2 (cirka 60 000 celler/ml, 12 ml medium i en T75) för proliferation. Håll cellerna vid 33 grader Celsius/5 % CO2 tills flaskan är cirka 75 % konfluent.
Vätskeförnyelse
3 gånger per vecka
Upptining och odling

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Ras / underart
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Donatorns ålder
Vuxen